ICS 65.020 B16 DB35 福 建 省 地 方 标 准 DB 35/T 1220—2011 大豆疫霉菌致病性测定 Technical standard for pathogenicity test of Phytophthora sojae 2011 - 12 - 31 发布 福建省质量技术监督局 2012 - 03 - 15 实施 发 布 DB35/T 1220—2011 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 术语与定义 ........................................................................ 1 3 致病性测定方法 .................................................................... 1 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 育苗 .......................................................................... 接种体制备 .................................................................... 接种时间 ...................................................................... 接种方法 ...................................................................... 接种后管理 .................................................................... 调查部位 ...................................................................... 调查时间 ...................................................................... 病情调查与记载 ................................................................ 1 1 2 2 2 2 2 2 4 病情指数计算 ...................................................................... 2 5 测定材料的灭活处理 ................................................................ 2 附录 A（规范性附录） 胡萝卜培养基制备 ................................................ 3 附录 B（规范性附录） 大豆疫病病情分级标准 ............................................ 4 I DB35/T 1220—2011 前 言 为规范大豆疫霉菌致病性测定技术，确保大豆疫霉菌致病性测定结果的准确性，有效地应用于大豆 疫病抗病种质资源筛选和育种工作，特制定本规范。 本标准按 GB/T 1.1-2009 《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写》给出的规则进行编写。 本标准由福建省农业科学院提出。 本标准由福建省农业厅归口。 本标准起草单位：福建省农业科学院植物保护研究所。 本标准主要起草人：兰成忠、陈庆河、翁启勇、李本金、赵健、邱荣洲。 II DB35/T 1220—2011 大豆疫霉菌致病性测定 1 范围 本标准规定了大豆疫霉菌致病性测定过程的致病性测定、结果计算、测定材料灭活处理的方法。 本标准适用于大豆疫霉菌致病性的测定。 2 术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 人工接种 Artifical inoculation 用人工培养的病原物，在人工控制的条件下，接种大豆植株诱发病害，根据大豆植株的发病程度判 断病原菌的致病性强弱。 2.2 接种体 Inoculant 用于人工接种致病性鉴定用的大豆疫霉菌（Phytophthora sojae）卵孢子悬浮液。 2.3 下胚轴伤口接种 Hypocotyls inoculation technique 供试品种生长至2叶~3叶真叶时，用带7号针头的接种用注射器（2 mL），以针尖在大豆苗子叶下茎 0.5 cm处向下划1 cm长的伤口，将接种体0.5 mL喷于伤口处。 2.4 对照品种 Contrast cultivar 在致病性测定时选定的感病品种Williams和当地主栽品种。 3 致病性测定方法 3.1 育苗 用于致病性测定的供试大豆品种（品系）和对照品种分别播于以新蛭石为基质的大小适宜的容器中， 株距(1~2)×(1~2)cm，育苗期温度控制在20℃~30℃。每处理应不少于15株，设置３个重复。 3.2 接种体制备 1 DB35/T 1220—2011 将供试菌株的菌丝块移至胡萝卜培养基（参见附录A）上，25℃~28℃恒温下黑暗培养8 d～10 d， 刮取培养基表面的培养物，用组织捣碎机配以适量无菌水将培养物捣碎成匀浆。在光学显微镜下观察培 养物匀浆中大豆疫霉菌卵孢子的数量，用血球计数板将孢子悬浮液的终浓度调配至每毫升约含2×104 个 孢子。接种体应在使用当天制备。 3.3 接种时间 测定的大豆苗长至2叶~ 3叶真叶期。 3.4 接种方法 采用下胚轴接种方法。 3.5 接种后管理 接种后的大豆苗在20℃～25℃、相对湿度90%以上保湿48 h，转入20℃～30℃的温室培养，保持土 壤含水量70%～80%。 3.6 调查部位 大豆苗下胚轴。 3.7 调查时间 接种4d后，当感病对照品种的株发病率75%以上、发病程度达到7级（参见附录B）以上方可进行病 情调查。每隔1d调查一次病情，至少连续调查5次。 3.8 病情调查与记载 按调查标准（参见附录B）逐株调查，记载病级。 4 病情指数计算 将供试大豆品种的病情指数按计算公式（1）计算。 病情指数 = 5 ∑ 病 级 株数 × 相应病级代表值 调查总株数 × 最高病 级 代表值 ×100…………………………(1) 测定材料的灭活处理 5.1 剩余接种体带回实验室经灭菌处理。 5.2 将致病性测定后的大豆病株集中焚烧处理。 5.3 用于栽培大豆苗的基质带回实验室进行 160℃干热灭菌处理。 5.4 用于栽培大豆苗的盆钵带回实验室，80℃水浴处理 2h 以上。 2 DB35/T 1220—2011 AA 附 录 A （规范性附录） 胡萝卜培养基制备 称取200g新鲜胡萝卜，切成小片后置于组织打碎机腔中，加入去离子水500mL，启动组织打碎机捣 碎约40s，倾出组织捣碎液，用4层纱布过滤，滤过液置于1000mL量杯中，补足去离子水到1000mL，倾 入可加热的容器中，加入琼脂16g，加热至琼脂完全融化，立即分装于带棉花或硅胶塞的三角瓶中，在 121℃下蒸汽灭菌20min后，冷却，取出，备用。 3 DB35/T 1220—2011 BB 附 录 B （规范性附录） 大豆疫病病情分级标准 0级：接种部位无变化或稍变褐； 1级：接种部位产生病斑，病斑面积占茎部面积的1/4以下； 3级：接种部位病斑面积占茎部总面积的1/4～1/2； 5级：接种部位病斑占茎部面积的1/2以上； 7级：接种部位病斑连片，已形成绕茎现象，但植株并没萎蔫或枯死； 9级：植株萎蔫或枯死。 _________________________________ 4 DB35/T 1220－2011 福 建 省 地 方 标 准 大豆疫霉菌致病性测定 DB35/T 1220—2011 * 2012 年 2 月第一版 2012 年 2 月第一次印刷