(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110867248.8 (22)申请日 2021.07.2 9 (71)申请人 厦门诺康得生物科技有限公司 地址 361000 福建省厦门市湖里区安岭路 995号6层6 07室之4 (72)发明人 李柱　王先武　路瑛　 (74)专利代理 机构 厦门市首创君 合专利事务所 有限公司 3 5204 专利代理师 张松亭　姜谧 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种表达唾液酸酶的肿瘤特异性嵌合抗原 受体及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种表达唾液酸酶的肿瘤特 异性嵌合抗原受体及其应用， 包括依次相连的 CD8信号肽区、 NEU1序列区、 P2A短肽区、 识别肿瘤 抗原的sc Fv区、 CD8铰链区、 跨膜区、 CD13 7胞内共 刺激信号区和CD3ζ胞内信号区。 本发明不仅保 留了T细胞、 NK细胞及巨噬细胞(M)的抗肿瘤活 性， 同时还能稳定表达唾液酸酶， 水解肿瘤细胞 表面的唾液酸以帮助CAR ‑T、 CAR‑NK或CAR‑M等免 疫细胞突破肿瘤免疫屏障， 提高CAR ‑T、 CAR‑NK或 CAR‑M对肿瘤细胞的杀伤效率， 实现CAR ‑T、 CAR‑ NK或CAR‑M在实体瘤治 疗中的运用。 权利要求书1页 说明书4页 序列表4页 附图2页 CN 115433286 A 2022.12.06 CN 115433286 A 1.一种表达唾液酸酶的肿瘤特异性嵌合抗原受体， 其特征在于： 包括依次相连的CD8信 号肽区、 NEU1序列区、 P2A短肽区、 识别肿瘤抗原的scFv区、 CD8铰链区、 跨膜区、 CD137胞内共 刺激信号区和CD3ζ 胞内信号区， 其中， NEU1序列区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.02所示； P2A短肽区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.03所示； CD8铰链区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.07所示； CD137胞内共刺激信号区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.08所示。 2.如权利要求1所述的肿瘤特异性嵌合抗原受体， 其特征在于： 所述肿瘤抗原为MUC1抗 原、 HER2抗原或EGFR抗原。 3.如权利要求2所述的肿瘤特异性嵌合抗原受体， 其特征在于： 所述肿瘤抗原为MUC1抗 原， 所述scFv区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.04所示。 4.如权利要求2所述的肿瘤特异性嵌合抗原受体， 其特征在于： 所述肿瘤抗原为HER2抗 原， 所述scFv区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.05所示。 5.如权利要求2所述的肿瘤特异性嵌合抗原受体， 其特征在于： 所述肿瘤抗原为EGFR抗 原， 所述scFv区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.06所示。 6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的肿瘤特异性嵌合抗原受体， 其特征在于： 所 述CD8信号肽区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.01所示， 所述CD3ζ胞内信 号区的核苷酸序列如 SEQ ID NO.09所示。 7.一种特异性靶向肿瘤细胞的免疫细胞， 其特征在于： 具有权利要求1至6中任一权利 要求所述的肿瘤特异性嵌合 抗原受体。 8.如权利要求7 所述的免疫细胞， 其特 征在于： 所述免疫细胞为T细胞。 9.如权利要求7 所述的免疫细胞， 其特 征在于： 所述免疫细胞为 NK细胞。 10.如权利要求7 所述的免疫细胞， 其特 征在于： 所述免疫细胞为巨噬细胞(M)细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115433286 A 2一种表达唾 液酸酶的肿瘤特异性嵌合 抗原受体及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学及免疫学技术领域， 具体涉及一种表达唾液酸酶的肿瘤特 异性嵌合 抗原受体及其应用。 背景技术 [0002]目前， 肿瘤生物治疗是继手术、 放疗和化疗之后的第四大疗法， 为处于平台期的传 统肿瘤治疗提供了新思路。 而细胞免疫治疗是生物疗法中的前沿技术， 具有相对毒副作用 小、 疗效显著等优势近年来备受关注。 嵌合抗原受体T/NK细胞(Chimeric  Antigen   Receptors ‑T/natural  killer cell， CAR ‑T/NK)使肿瘤的细胞疗法得到了革命性的发展。 自2017年， 全球第一个CAR ‑T细胞药物获批上市用于治疗急性淋巴细胞性白血病以来， CAR ‑ T技术不断成熟， 在血 液瘤的治疗中取 得了一定的成效， 逐渐成为血 液瘤治疗的新趋势。 [0003]目前虽已有CAR ‑T治疗实体瘤的成功报 导， 但是CAR ‑T在治疗恶性实体瘤时通常难 以突破肿瘤微环境进入到实体瘤内部， 大 大的阻碍其功能的充分发挥。 [0004]唾液酸(Sialic  acid， SA)又称为N ‑乙酰神经氨酸(NANA)， 是分布在细胞膜表面糖 链最末端9 ‑碳单糖衍生物， 存在于人体各种组织细胞内， 在机体中发挥着重要的作用[9]。 而唾液酸对肿瘤细胞 的修饰， 可使肿瘤细胞逃避机体免疫系统的发现与杀伤。 同时高水平 的唾液酸化也会减弱肿瘤细胞的粘附性有利于肿瘤细胞的侵袭和 转移。 近年来， 研究者们 通过靶向去除肿瘤细胞表面唾液酸， 以增加机体先天免疫系统对肿瘤细胞的辨认和 攻击。 早在2016年， 斯坦福大学的Bertozzi 教授利用霍乱弧菌的唾液酸 酶对肿瘤细胞表 面的唾液 酸进行水解， 提高了免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤 能力。 然而该唾液酸酶是通过与抗体偶联 方式来特异性靶向肿瘤， 缺 乏稳定性也容易造成脱靶效应。 同时该唾液酸酶还存在一定的 免疫原性， 在体内发挥功效的时间非常有限， 因此开发出一种能够在机体内持久且稳定表 达的唾液酸酶具有重要意 义。 发明内容 [0005]本发明的目的在于克服现有技术缺陷， 提供一种表达唾液酸酶的肿瘤特异性嵌合 抗原受体。 [0006]本发明的另一目的在于提供一种具有上述肿瘤特异性嵌合 抗原受体的免疫细胞。 [0007]本发明的技 术方案如下： [0008]一种表达唾液酸酶的肿瘤特异性嵌合抗原受体， 包括依次相连的CD8信号肽区、 NEU1序列区、 P2A短肽区、 识别肿瘤抗原的scFv区、 CD8铰链区、 跨膜区、 CD137胞内共刺激信 号区和CD3ζ 胞内信号区， 其中， [0009]NEU1序列区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.02所示； [0010]P2A短肽区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.03所示； [0011]CD8铰链区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.07所示； [0012]CD137胞内共刺激信号区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.08所示。说　明　书 1/4 页 3 CN 115433286 A 3