(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110716005.4 (22)申请日 2021.06.28 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113384709 A (43)申请公布日 2021.09.14 (73)专利权人 西南大学 地址 400715 重庆市北碚区天生路2号 (72)发明人 许志刚　叶孟婕　贾蝶　康跃军　 (51)Int.Cl. A61K 47/61(2017.01) A61K 41/00(2020.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 49/00(2006.01) A61K 49/22(2006.01) (56)对比文件 CN 108774301 A,2018.1 1.09 CN 103041405 A,2013.04.17 CN 112618727 A,2021.04.09 CN 111643673 A,2020.09.1 1CN 110041475 A,2019.07.23 CN 109069472 A,2018.12.21 CN 103330938 A,2013.10.02 KR 20080095182 A,20 08.10.28 王毅.多重刺激响应型聚合物纳米 颗粒在癌 症治疗中的研究. 《中国博士学位 论文全文数据 库 (工程科技 Ⅰ辑)》 .2018, 杜琛.胞内示踪的光动-化疗协同治 疗 pH敏 感纳米载药系统的构建和评价. 《中国优秀博硕 士学位论文全文数据库(硕士) （工程科技 Ⅰ 辑） ） 》 .2021, (续) 审查员 蒋嘉瑜 (54)发明名称 一种葡聚糖-原卟啉前药纳米胶 束的制备和 应用 (57)摘要 本发明公开了一种葡聚糖 ‑原卟啉前药纳米 胶束的制备和应用， 制备方法包括以下步骤： （1） 氨基化原卟啉 （PpIX ‑NH2） 的制备； （2） 醛基化葡 聚糖 （DEX ‑CHO） 的制备； （3） DEX ‑CHO‑PpIX‑NH2及 其DEX‑PpIX胶束的制备。 所制备的胶束粒径稳 定、 分散均一、 较高药物上载量、 低毒副作用、 良 好的生物安全性、 良好的药物控释等优势， 从根 本上改善了原卟啉的水溶性差的问题。 葡聚糖对 原卟啉的修饰， 大大降低光敏剂 对正常细胞的毒 副作用， 同时， 小分子前药在癌细胞中可控释放， 致使原卟啉在肿瘤部位有效富集， 通过激光照 射， 杀死癌细胞实现精确诊疗， 为小分子光疗前 药递送系统的发展提供一种新的策略和系统性的理论支撑 。 [转续页] 权利要求书1页 说明书4页 附图4页 CN 113384709 B 2022.03.11 CN 113384709 B (56)对比文件 王亚君.还原响应型高分子药物递送系统的 构建及其在增强癌症治 疗中的应用. 《中国优秀 博硕士学位 论文全文数据库(硕士) （工程科技 Ⅰ 辑） ） 》 .2020, Yi Wang et al.A Step-by-Step Multiple Stimuli-Responsive Nan oplatform for Enhancing Combi ned Chemo-Photodynamic Therapy. 《Advanced Materials》 .2017, Tingting Hu et al.Recent advances i n innovative st rategies for enhanced cancer photodynamic therapy. 《Theran ostics》 .2021, 第11卷(第7期), Houhe Liu et al.T umor Microenviro nment-Respo nsive Nan omaterials as Targeted Del ivery Car riers for Photodynamic Anticancer Therapy. 《Frontiers i n Chemistry》 .2020,第8卷 Xiao Wei.L ight-Activated ROS- Responsive Nan oplatform Codel ivering Apatinib and Doxorubici n for Enhanced Chemo-Photodynamic Therapy of Multidrug- Resistant T umors. 《ACS Ap pl. Mater. Interfaces》 .2018, Lei Wang et al.T umor-targeti ng core- shell structured nan oparticles for drug procedural co ntrolled release and cancer sonodynamic combi ned therapy. 《J Co ntrol Release》 .2017,第28卷(第286期),2/2 页 2[接上页] CN 113384709 B1.一种葡聚糖 ‑原卟啉前 药纳米胶束的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： （1） 整个反应过程在氩气环境中进行， 氩气作为保护气， 防止氧气或氢气的存在对反应 造成影响； 同时， 整个制备过程中因光敏剂原卟啉的存在， 应进行避光处理； 将一定量的原 卟啉PpIX溶于无水二氯甲烷DCM， 得到原卟啉溶液， 随后在冰浴下加入一定量的N ‑（3‑二甲 基氨基丙基） ‑N'‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC、 N ‑羟基琥珀酰亚胺 NHS不断搅拌使其溶解， 溶解 后继续冰浴搅拌30 min， 随后加入一定量的肼， 室温下反应6h； 反应结束后， 用去离子水反复 萃取3次， 得到PpIX ‑NH2； （2） 将一定量葡聚糖溶解于二甲基亚砜DMSO和N ‑甲基吡咯烷酮NMP 混合溶液中， 超声溶 解， 得到葡聚糖溶 液； 所述的混合溶 液中DMSO与NMP的体积比为1:1； （3） 整个反应过程在氩气且避光的环境中进行， 将一定量氯铬酸吡啶盐PCC溶于DMSO， 待PCC完全 溶解后， 快速搅拌下用注 射器将步骤 （2） 的葡聚糖溶液逐滴滴入， 室温下反应6h； 反应结束后， 加入乙醚反 复洗涤产 物2次， 这时会有部 分沉淀出现， 除去 上清， 加入乙醚 继续 洗涤， 洗去副产物三乙胺盐； 加入二氯甲烷CH2Cl2洗涤2次， 除去上清， 洗去溶剂DMSO以及部 分未反应完全的P CC； 最后再次用乙醚洗涤， 去上清， 待沉淀中的乙醚挥发完全后， 真空干燥 箱干燥24h， 得到DEX ‑CHO； （4） 整个反应过程在氩气且避光的环境中进行， 将一定量的PpIX ‑NH2和DEX‑CHO加入二 甲基亚砜DMSO与N,N ‑二甲基亚砜DMF的混合溶液中， 搅拌下加入一定量三乙胺， 室温条件 下 反应24h； 反应结束， 以甲醇为透析液， 分子量为3500的透析袋透析约24h， 取出产物， 进 行旋 蒸； 旋蒸至还剩些许液体时， 加入乙醚沉淀， 离心去除上清液， 真空干燥24h， 得到DEX ‑CHO‑ PpIX‑NH2； 所述混合溶 液中DMSO与DMF体积比为2:3； （5） 将一定量DEX ‑CHO‑PpIX‑NH2溶于DMF， 随后将其用移液枪慢慢滴入快速搅拌状态下 的去离子水中， 得到混合溶液， 搅拌30min， 转移至分子量3500的透析袋透析约24h， 透析液 为去离子水， 得到DEX ‑PpIX胶束。 2.根据权利要求1所述的一种葡聚糖 ‑原卟啉前药纳米胶束的制备方法， 其特征在于： 所述步骤 （1） 中，  原卟啉溶液的摩尔浓度范围为0.01~0.06mol·L‑1； 所述EDC与NHS摩尔比 为1:1且EDC与NHS摩尔浓度范围为0.04~0.12mol·L‑1。 3.根据权利要求1所述的一种葡聚糖 ‑原卟啉前药纳米胶束的制备方法， 其特征在于： 所述步骤 （2） 中， 葡聚糖的摩尔浓度范围为0.01~0.03mol· L‑1。 4.根据权利要求1所述的一种葡聚糖 ‑原卟啉前药纳米胶束的制备方法， 其特征在于： 所述步骤 （3） 中， PCC的摩尔浓度范围为0.15~0.40 mol·L‑1； 洗涤产物过程 中， 产物与乙醚 的体积比范围为1:1~1:2； 产物与二氯甲烷的体积比范围为1:1~1:2。 5.根据权利要求1所述的一种葡聚糖 ‑原卟啉前药纳米胶束的制备方法， 其特征在于： 所述步骤 （4） 中，  PpIX‑NH2质量浓度范围为7~9 mg·mL‑1； DEX‑CHO质量浓度范围为35 ‑40  mg·mL‑1； 三乙胺的体积3 0‑60 μL； 透析 过程中产物与甲醇的体积比例范围为1:15 0~1:300。 6.根据权利要求1所述的一种葡聚糖 ‑原卟啉前药纳米胶束的制备方法， 其特征在于： 步骤 （5） DE X‑CHO‑PpIX‑NH2溶于DMF中得到的质量浓度范围为0.1~0.2mg·mL‑1； 混合溶液的 质量浓度范围为0.5~0.8 mg·mL‑1； 透析过程中胶束与去离子水的体积比例范围为1:200~ 1:300。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113384709 B 3