(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110999620.0 (22)申请日 2021.08.2 9 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113648289 A (43)申请公布日 2021.11.16 (73)专利权人 重庆医科 大学 地址 400016 重庆市渝中区医学院路1号 (72)发明人 张景勍　袁誉铭　杨强　袁子怡　 何丹　吴诗情　 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 38/50(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01)B82Y 40/00(2011.01) (56)对比文件 CN 109078183 A,2018.12.25 CN 112494495 A,2021.0 3.16 CN 111603454 A,2020.09.01 US 5372942 A,19 94.12.13 JP H04121187 A,19 92.04.22 US 2013052179 A1,2013.02.28 杨强等.TPGS 修饰载精 氨酸脱亚胺酶环糊 精脂质纳米粒的酶活性和药动学研究. 《中国药 理学通报 》 .2021,第37 卷(第3期),3 62-366. 审查员 耿胜燕 (54)发明名称 一种肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质 纳米粒及其制备方法 (57)摘要 本发明属于药物制剂领域。 本发明涉及肺癌 细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒及其制 备方法。 本发 明制备得到肺癌细胞膜包裹精氨酸 脱亚胺酶脂质纳米粒可以增加精氨酸脱亚胺酶 的稳定性， 提高精氨酸脱亚胺酶抗蛋白酶水解的 能力， 提高生物利用度， 且具有 靶向性。 权利要求书1页 说明书11页 附图2页 CN 113648289 B 2022.10.28 CN 113648289 B 1.一种肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒， 其特征在于， 包括精氨酸脱亚胺 酶脂质纳米粒和肺癌细胞膜包裹层； 所述的精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒中精氨酸脱亚胺酶含量为2 ‑28U/mL， 缓冲液pH为5 ‑ 9， 其余各组分重量比为： 所述的肺癌细胞膜， 包括小细胞肺癌细胞膜、 非小细胞肺癌细胞膜的一种或多种； 所述的一种肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒的制备包括下列步骤： (1)精 氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒的制备方法： 将精氨 酸脱亚胺酶溶解于Tr is缓冲液中得到精氨 酸 脱亚胺酶溶液， 将处方量的卵磷脂、 胆固醇和聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯溶解于10 ‑ 30mL二氯甲烷、 三氯甲烷、 丙酮、 乙酸乙酯、 无水乙醇、 甲醇、 乙醚中的一种或多种有机溶剂 中， 旋转蒸发除去有机溶剂形成均匀 脂质薄膜， 加入精氨酸脱亚胺酶溶液， 35 ‑45℃水浴下 水合1‑3小时， 超声0.1 ‑1小时， 过0.22 ‑0.45 μm微孔滤膜得到乳状液A； 取处方量壳聚糖溶解 于水相1中得到壳聚糖溶液， 在 搅拌的条件下， 将 乳状液A缓慢加入到壳聚糖溶液中， 持续搅 拌0.5‑1.5小时， 过0.22 ‑0.45 μm微孔滤膜， 即得精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒； (2)单一肺癌 细胞膜的制备方法： 培养并收集肺癌细胞， 数量为2000 ‑5000万个， 用磷酸盐缓冲液洗涤3 ‑5 次， 加入0.8 ‑1.0mL含有1％的苯甲基磺酰氟的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽取试剂， 混匀后 冰浴条件下孵育10 ‑15分钟， 超声10 ‑30秒， 离心10 ‑15分钟， 取上清液， 再离心20 ‑40分钟， 收 集沉淀， 分散于水相2， 即得肺癌细胞膜； (3)多种肺癌细胞膜的制备方法： 按步骤(2)分别制 备各种肺癌细胞膜， 混匀 后备用； (4)将步骤(2)得到的一种肺癌细胞膜或步骤(3)得到的多 种肺癌细胞膜在冰浴条件下超声1 ‑2分钟， 使用脂质体挤出器过400nm聚碳酸酯膜挤出， 来 回挤出次数10 ‑20次， 再将肺癌细胞膜与精氨 酸脱亚胺酶脂质纳米粒以体积比1:2至2:1， 混 合均匀， 使用脂质体挤出器分别通过400nm和200nm聚碳酸酯膜挤出， 来回挤出次数10 ‑30 次， 即得肺癌细胞膜包裹精 氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113648289 B 2一种肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒 及其制备 方法 技术领域 [0001]本发明属于医药制剂领域， 涉及肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质纳 米粒及其 制备方法。 背景技术 [0002]肺癌是最常见恶性肿瘤之一， 发病率和死亡率均 高居不下， 目前临床上药物治疗 多以铂类和DNA拓扑异构酶抑制剂(如依 托泊苷、 托泊替康)为主。 这类化疗药物具有较大的 细胞毒性作用， 因未靶向聚集到癌症病灶， 将产生明显的的全身毒副作用， 如肾脏毒性、 骨 髓抑制、 神经毒性和过敏等。 同时其化疗药物的耐药性， 已成为了肿瘤治疗中的最大阻碍。 精氨酸为半必需氨基酸， 在蛋白质、 多肽、 氨基酸和尿素等的生物合成中必不可少。 因精氨 酸脱亚胺酶为精氨酸水解专一酶， 能够耗竭癌症病灶微环境中的精氨酸， 进而诱发肿瘤细 胞发生自噬、 衰老等应激反应， 同时诱导肿瘤T细胞浸润， 发挥其抗癌作用。 但稳定性差、 低 靶向性、 生物利用度低等缺点， 极大限制其临床 应用。 脂质纳米粒可将药物包封在类脂质双 分子层内而形成的微型囊泡内， 可递送亲水性或疏水性蛋白质药物， 它 具有增强药物稳定 性、 延长药物作用时间及提高药物生物利用度等优点。 聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯是一 种水溶性维生素和非离子型表面活性剂， 能抑制P ‑糖蛋白介导的外排作用， 克服肿瘤细胞 多药耐药行为， 能提高药物穿透性及对CD44+进行靶向。 壳聚糖为天然的带正电荷水溶性大 分子材料， 具有良好的生物相容性、 增强药物稳定性等特性， 并能与负电荷的脂质体产生静 电吸引形成 壳聚糖纳米粒， 且壳聚糖纳米粒能通过被动和主动靶向将药物递送到特定的肿 瘤部位。 细胞膜是细胞与外界进行频繁交互的界面， 其上具有各种蛋白质、 糖类和脂质等， 是发挥细胞特异性功 能的关键。 癌细胞具有对癌灶特异趋附归巢的功 能， 使用癌细胞膜对 纳米粒进行伪装， 能够使纳米粒子继承生物膜的表面蛋白和特殊功能。 癌细胞膜包覆纳米 粒本质上是一种仿生膜制剂， 具有对同型肿瘤的特异 性靶向性， 其不仅对原发病灶， 并能对 转移癌进行追踪， 最终大 大提高药物疗效 并降低药物毒副作用。 [0003]经查询专利及文献， 目前尚无载带治疗酶的聚乙二醇1000 维生素E琥珀酸酯/壳聚 糖双重修饰脂质纳米粒的任何报道， 尚无肺癌细胞膜包裹的载带治疗酶的聚乙二醇1000维 生素E琥珀酸酯/壳聚糖双重修饰脂质纳米粒的任何报道， 当然， 目前也尚无载带精氨酸脱 亚胺酶的聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯 /壳聚糖双重修饰脂质纳米粒的任何报道， 尚无载 带精氨酸脱亚胺酶的肺癌细胞膜包裹的聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯/壳聚糖双重修饰 脂质纳米粒的任何报道。 本发明制备得到的肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶壳聚糖脂质纳 米粒(聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯/壳聚糖双重修饰脂质纳米粒)可以增加精氨酸脱亚 胺酶的稳定性， 提高精氨酸脱亚胺酶抗蛋白酶水解的能力， 提高生物利用度， 且具有靶向 性， 可以用于肺癌治疗。说　明　书 1/11 页 3 CN 113648289 B 3