(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110931829.3 (22)申请日 2021.08.13 (71)申请人 苏州科锐迈 德生物医药 科技有限公 司 地址 215123 江苏省苏州市自由贸易试验 区苏州片区苏州工业园区新平街388 号腾飞科技园23 栋201单元 (72)发明人 左炽健　仇宗浩　杨嘉丽　朱佳凤　 李娜　孙振华　 (74)专利代理 机构 北京林达刘知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11277 专利代理师 刘新宇　李茂家 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12N 15/13(2006.01)C12N 15/26(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 38/17(2006.01) A61K 48/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种组织特异性表达的环状RNA分子及其应 用 (57)摘要 本公开属于生物医药技术领域， 具体来说， 本公开涉及一种组织特异性表达的环状RNA分 子、 环化前体RNA分子、 重组核酸分子、 重组表达 载体、 重组宿主细胞、 组合物、 药物制剂及其在制 备预防或治疗疾病的药物中的应用， 以及一种预 防或治疗疾病的方法。 本公开提供的环状RNA分 子， 将编码区与表达调控元件可操作地连接， 实 现了目标多肽在靶细胞或靶组织中特异性高表 达， 在非靶细胞或非靶组织中的低表达， 具有高 的组织表达特异性， 为肿瘤等疾病的临床靶向治 疗提供了安全、 有效的治 疗策略。 权利要求书4页 说明书30页 序列表28页 附图3页 CN 114591952 A 2022.06.07 CN 114591952 A 1.一种环状RNA分子， 其中， 所述环状RNA分子包括编码目标多肽的编码区， 和与所述编 码区可操作地连接的表达调控 元件； 所述表达调控 元件具有如下(i) ‑(ii)组成组中任一项 所示的特性： (i)使所述目标多肽 在靶细胞或靶组织中的表达增强， (ii)使所述目标多肽 在非靶细胞或非靶组织中的表达减弱。 2.根据权利要求1所述的环状RNA分子， 其中， 所述环状RNA分子包含如(ii)所示的表达 调控元件； 其中， 所述表达调控 元件包含一个或多个与miRNA的序列杂交的miRNA识别区； 优 选地， 所述mi RNA在所述非靶细胞或非靶组织中的表达水平高于所述mi RNA在所述靶细胞或 靶组织中的表达水平； 更优选地， 所述mi RNA在非肿瘤细胞或非肿瘤组织中的表达水平高于 所述miRNA在肿瘤 细胞或肿瘤组织中的表达水平。 3.根据权利要求1或2所述的环状RNA分子， 其中， 所述表达调控元件包含与如下一种或 多种miRNA的序列杂交的一个或多个的miRNA 识别区： miR‑122、 miR‑152、 miR‑148、 miR‑194、 miR‑199、 miR‑215、 miR‑18、 miR‑20、 miR‑24、 miR‑ 30b、 miR‑30c、 miR‑32、 miR‑141、 miR‑192、 miR‑193、 miR‑194、 miR‑200b、 miR ‑204、 miR‑18、 miR‑19a、 miR‑20、 miR‑24、 miR‑32、 miR‑126、 miR‑133、 miR‑141、 miR‑193、 miR‑200b、 miR ‑ 213、 miR‑1、 miR‑133、 miR‑143、 miR‑149、 miR‑206、 miR‑208、 miR‑7、 miR‑9、 miR‑124、 miR‑ 125、 miR‑128、 miR‑132、 miR‑135、 miR‑137、 miR‑139、 miR‑149、 miR‑153、 miR‑183、 miR‑190、 miR‑219、 miR‑16、 miR‑21、 miR‑24、 miR‑27、 miR‑99a、 miR‑127、 miR‑132、 miR‑142、 miR‑151、 miR‑181、 miR‑189、 miR‑212、 miR‑223、 miR‑17、 miR‑92； 优选地， 所述miRNA 识别区包 含如下(a1)‑(a2)任一项所示的序列： (a1)如SEQ ID NO： 2‑66任一序列所示的核苷酸序列； (a2)与(a1)所示的核苷酸序列具有至少90％， 可选至少95％， 优选至少97％， 更优选至 少98％， 最优选 至少99％的序列同一 性的序列； 可选地， 所述表达调控元件包含一个或多个如(a1)或(a2)任一项所示的miRNA识别区； 优选地， 所述表达调控元件选 自如SEQ ID NO： 1所示核苷酸序列中插入一个或多个如(a1) 或(a2)任一项所示的miRNA识别区的序列； 优选地， 所述表达调控元件的核苷酸序列为如 SEQ ID NO： 1所示核苷酸序列中插入1个、 2个或3个如(a1)或(a2)任一项所示的miRNA识别区 的序列； 更优选的， 当所述miRNA识别区的插入如SEQ  ID NO： 1所示核苷酸序列的第88和第 89位的核苷酸之间、 第48和第49位的核苷酸之间， 或第9位和第10位的核苷酸之间。 4.根据权利 要求1‑3任一项所述的环状RNA分子， 其中， 所述环状RNA分子包含与所述编 码区可操作地连接的翻译起始元件， 和所述(ii)所示的表达调控元件； 可选地， 所述翻译起 始元件位于所述编码区的上游， 所述(ii)所示的表达调控元件位于所述编码区的下游； 优 选地， 所述翻译起始元件为 IRES元件； 优选地， 所述 IRES元件 包含如下(i ii)‑(v)组成的组中的任一项： (iii)包含如SEQ  ID NO： 78‑81任一序列所组成的组中的一种或多种序列的核苷酸序 列； (iv)包含如SEQ ID NO： 78‑81任一序列所示的序列的反向互补序列的核苷酸序列； (v)在高严格性杂交条件或非常高严格性杂交条件下， 能够与(i)或(ii)所示的核苷酸 序列杂交的序列的反向互补序列；权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 114591952 A 2(vi)与(iii)或(iv)所示 的核苷酸序列具有至少90％， 可选至少95％， 优选至少97％， 更优选至少98％， 最优选 至少99％的序列同一 性的序列； 优选地， 所述 IRES元件选自如下(b1)‑(b7)中的任一项： (b1)包含如SEQ ID NO： 78所示序列的核苷酸序列； (b2)包含如SEQ ID NO： 79所示序列的核苷酸序列； (b3)包含如SEQ ID NO： 80所示序列的核苷酸序列； (b4)包含如SEQ ID NO： 81所示序列的核苷酸序列； (b5)包含如SEQ ID NO： 82所示序列的核苷酸序列； (b6)包含如SEQ ID NO： 83所示序列的核苷酸序列； (b7)包含如SEQ ID NO： 84所示序列的核苷酸序列。 5.根据权利 要求4所述的环状RNA分子， 其中， 所述环状RNA分子还包括如下的一种或多 种元件： 5 ’间隔区、 3 ’间隔区、 第二外 显子、 第一外 显子、 所述(i)所示的表达调控元件。 6.根据权利 要求5所述的环状RNA分子， 其中， 所述环状RNA分子包括位于所述翻译起始 元件上游的5 ’间隔区， 和位于所述表达调控元件下游的3 ’间隔区； 优选地， 所述5 ’间隔区包 含如下(c1)‑(c2)中任一项所示的序列： (c1)如SEQ ID NO： 85‑86任一序列所示的核苷酸序列； (c2)与(c1)所示的核苷酸序列具有至少90％， 可选至少95％， 优选至少97％， 更优选至 少98％， 最优选 至少99％的序列同一 性的序列； 优选地， 所述3 ’间隔区包 含如下(d1)‑(d2)中任一项所示的序列： (d1)如SEQ ID NO： 87‑89任一序列所示的核苷酸序列； (d2)与(d1)所示的核苷酸序列具有至少90％， 可选至少95％， 优选至少97％， 更优选至 少98％， 最优选 至少99％的序列同一 性的序列。 7.根据权利 要求5所述的环状RNA分子， 其中， 所述环状RNA分子还包括位于所述5 ’间隔 区上游的第二外 显子， 和位于所述3 ’间隔区下游的第一外 显子； 优选地， 所述第二外 显子包含如下(e1)‑(e2)中任一项所示的序列： (e1)如SEQ ID NO： 91所示的核苷酸序列； (e2)与(e1)所示的核苷酸序列具有至少90％， 可选至少95％， 优选至少97％， 更优选至 少98％， 最优选 至少99％的序列同一 性的序列； 优选地， 所述第一外 显子包含如下(f1)‑(f2)中任一项所示的序列： (f1)如SEQ ID NO： 90所示的核苷酸序列； (f2)与(f1)所示的核苷酸序列具有至少90％， 可选至少95％， 优选至少97％， 更优选至 少98％， 最优选 至少99％的序列同一 性的序列。 8.根据权利要求1 ‑7任一项所述的环状RNA分子， 其中， 所述目标多肽为具有疾病预防 或治疗活性的多肽， 优选为具有肿瘤预防或治疗活性的多肽； 可选地， 所述具有肿瘤预防或 治疗活性的多肽选自如下的一种或多种： 细胞因子、 抗原结合片段、 免疫检查 点抑制剂； 可选地， 所述细胞因子 选自IL、 IFN、 TNF、 GM ‑