(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110808192.9 (22)申请日 2021.07.16 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113501875 A (43)申请公布日 2021.10.15 (73)专利权人 四川大学华西医院 地址 610041 四川省成 都市武侯区国学巷 37号 (72)发明人 张臣良　毕锋　 (74)专利代理 机构 成都科海专利事务有限责任 公司 51202 专利代理师 刘业芳 (51)Int.Cl. C07K 16/40(2006.01) C12N 15/13(2006.01)C12N 15/70(2006.01) C12N 1/21(2006.01) G01N 33/573(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/19(2006.01) 审查员 李颖 (54)发明名称 一种特异性结合蛋白激酶p38γ的纳米抗 体、 核酸、 表达载体、 宿主细胞及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种特异性结合蛋白激酶p38 γ的纳米抗体、 核酸、 表达载体、 宿主细胞及其应 用， 所述纳米抗体具有至少一种以下所示的互补 决定区： 如SEQIDNO.1所示氨基酸序列的互补 决 定区CDR1； 如SEQIDNO.2所示氨基酸序列的互补 决定区CDR2； 和如SEQIDNO.3所示氨基酸序列的 互补决定区CDR3。 此纳米抗体具有针对蛋白激酶 p38γ独特的抗原互补决定区， 对蛋白激酶p38γ 显示出了高度特异的结合活性， 且不与p38MAPK 的其他家族蛋白p38α、 p38β和p38δ发生交叉 反应。 同时本申请的纳米抗体具有突出的热稳定 性和酸碱稳定性。 权利要求书1页 说明书5页 序列表5页 附图2页 CN 113501875 B 2022.10.18 CN 113501875 B 1.一种特异性结合蛋白激酶p38γ的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体的互补决定 区CDR1、 互补决定区CDR2和互补决定区CDR3的氨基酸序列分别为SEQ  ID NO.1所示氨基酸 序列、 SEQ ID NO.2所示氨基酸序列和SEQ  ID NO.3所示氨基酸序列。 2.根据权利要求1所述的特异性结合蛋白激酶p38γ的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳 米抗体的氨基酸序列为SEQ  ID NO.7所示的氨基酸序列。 3.一种编码权利要求1或2所述的特异性结合蛋白激酶p38γ的纳米抗体的核酸。 4.根据权利要求3所述的核酸， 其特征在于， 所述核酸的核苷酸序列如SEQ  ID NO.8所 示。 5.一种含有权利要求3至4任一项所述的特异性结合蛋白激酶p38γ的纳米抗体的核酸 的表达载体， 其特 征在于， 所述表达载体为原核生物 表达载体或真核生物 表达载体。 6.根据权利要求5所述的表达载体， 其特 征在于， 所述表达载体为pET2 2b。 7.一种含有权利要求5或6所述的表达载体的宿主细胞， 其特征在于， 所述宿主细胞为 原核生物细胞或真核生物细胞。 8.权利要求1所述的特异性结合蛋白激酶p38γ的纳米抗体在制备用于检测蛋白激酶 p38γ的检测试剂盒中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113501875 B 2一种特异性结 合蛋白激酶p38 γ的纳米抗体、 核酸 、 表达载体、 宿主细胞及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 且特别涉及一种特异性结合蛋白激酶p38γ 的纳米抗 体、 核酸、 表达载体、 宿主细胞及其应用。 背景技术 [0002]p38γ是p38 MAPK家族中的一种丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激 酶， 主要参与调控细 胞外刺激与细胞内应答之间的信号转导。 p38  MAPK家族共有四个成员， 即p38α、 p38β 、 p38γ 以及p38 δ。 虽然 所有的p38  MAPKs在序列及结构上都 高度保守， 但是他们在生理和病理环境 中的功能却不尽相同。 其中， p38α和  p38β 广泛表达于各种细胞和组织， 调控细胞的基本生 命活动。 例如： p38α 在白细胞、 肝、 脾、 小脑、 骨髓、 甲状 腺及胎盘中具有较高的表达水平； p38 β 主要在脑和心脏中进行表达。 而p38γ和p38δ 的表达具有组织细胞特异性， 并受严格的调 控， p38γ主要在骨骼肌中表达； p38 δ 的表达主要在肺、 肾、 肠、 唾液腺的表皮细胞及睾丸、 卵 巢、 肾上腺和垂体。 近年来研究揭示， p38γ在多种肿瘤疾病的发生发展中发挥中的调控功 能， 如肝癌、 肠癌、 乳 腺癌等。 p38γ作为一种类似CDK的激酶， 其与CDK蛋白(与调控细胞周期 有关)在结构和功能上相 似性很高， p38γ能够诱使细胞进入分裂周期， 因此， p38γ可以作 用一种肿瘤诊断生物标志 物及治疗 靶点。 [0003]纳米抗体是源于重链抗体可变区域的小 分子抗体， 其分子量约为15kDa， 具有亲和 力高、 稳定性 强、 组织相容性好以及易筛选、 易制备等特点， 近年来在 治疗型药物抗体、 临床 检测型抗体、 科研运用型抗体等方面得到了广泛的研究与发展。 纳米抗体主要 是由4个保守 的骨架区(FR)和3个抗原互补决定区  (CDR)依次交叉串联形成， 其中， 抗原互补决定区 (CDR)是抗原识别及抗原结合的主要执行部位。 所以纳米抗体的筛选关键在于获得可以介 导与抗原特异性结合的互补决定区。 纳米抗体中的互补决定区根据其在整个抗体中的位置 不同， 可以依次分为三个独立区域， 即互补决定 区1(CDR1)、 互补决定 区2 (CDR2)和互补决 定区3(CDR3)。 与传 统抗体相比， 纳米抗体互补决定区的氨基酸序列较长， 使得其可以深入 抗原较为隐匿的结构 中与其相互作用。 纳米抗体还具有良好的热稳定性和酸碱稳定性， 这 为其在检测、 治疗等领域的应用提供了传统抗体所无法比拟的优越性。 因此， 若提供一种能 够特异性结合蛋白激酶p38γ的纳米抗体， 对于以p38γ为生物标志物和治疗靶点的肿瘤 疾 病诊断、 治疗提供了新的思路和研究方向。 发明内容 [0004]本发明的第一目的在于提供一种特异性结合蛋白激酶p38γ的纳米抗体， 此纳米 抗体具有针对蛋白激酶p38γ独特的抗原互补决定区， 对蛋白激酶p38  γ显示出了高度特 异的结合活性， 且不与p38  MAPK的其他家族 蛋白p38α、  p38β和p38δ发生交叉反应。 同时本 申请的纳米抗体具有突出的热 稳定性和酸碱稳定性。 [0005]本发明的第二目的在于提供编码所述的特异性结合蛋白激酶p38γ的纳 米抗体的说　明　书 1/5 页 3 CN 113501875 B 3