(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110823372.4 (22)申请日 2021.07.21 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113549143 A (43)申请公布日 2021.10.26 (73)专利权人 吉林大学 地址 130012 吉林省长 春市前进大街269 9 号 (72)发明人 徐力　郭轶　黄斯俊　张熙　 张明明　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 苏士莹 (51)Int.Cl. C07K 14/47(2006.01) C08F 8/30(2006.01) C08F 293/00(2006.01) A61K 38/17(2006.01) A61K 9/107(2006.01) A61K 47/32(2006.01) A61K 47/18(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) (56)对比文件 WO 0059526 A1,20 00.10.12CN 102958940 A,2013.0 3.06 US 2003139344 A1,2003.07.24 CN 106565835 A,2017.04.19 CN 112843247 A,2021.0 5.28 CN 107111691 A,2017.08.2 9 CN 101302256 A,2008.11.12 彭军 等.Bax BH 3结构域的多肽链(H2- H3) 通过抑制Bcl-2的成孔和中和Bcl-2的抗Bax作用 而引起细胞凋亡. 《生物医学工程学杂志》 .20 09, (第4期),第82 9-835页. L P Billen 等.Bid: a Bax-l ike BH3 protein. 《Oncogene》 .20 08,第27卷 张静 等.仅含BH 3区域蛋白(BOPs)与Bax的 研究. 《医学综述》 .20 07,第12卷(第23期),第 1417-1419页. 刘广.抗凋亡蛋白mcl-1结合bh 3结构域多肽 的分子动力学研究. 《中国优秀硕士学位 论文全 文数据库 医药卫 生科技辑》 .2011,(第12期), E072-18. Philippe Juin 等.Activati on of Bax by BH3 Domains during Apoptosis:The zunfolding of a Deadly Pl ot. 《Cell Cycle》 .2005,第4卷第6 37-742页. 审查员 李梦华 (54)发明名称 一种抗肿瘤多肽Bax-BH3、 荧光高分子纳米 胶束及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明提供了一种抗肿瘤多肽Bax ‑BH3、 荧 光高分子纳米胶束及其制备方法和应用， 属于医 药技术领域， 所述抗肿瘤多肽Bax ‑BH3的氨基酸 序列如SEQIDNo.1所示； 所述荧光高分子纳米胶 束， 包括所述的抗肿瘤多肽Bax ‑BH3和高分子载 体， 所述高分子 载体为嵌段共聚物RGD ‑PHPMA‑b‑ Poly(MMA ‑alt‑(Rhob‑MA))。 本发明所述抗肿瘤 多肽Bax‑BH3具有良好的生物相容性和生物学活性； 所述荧光高分子纳米胶束以嵌段共聚物RGD ‑ PHPMA‑b‑Poly(MMA‑alt‑(Rhob‑MA))包裹抗肿瘤 多肽Bax‑BH3， 包封率和载药量高， 释放性能良 好。 权利要求书1页 说明书11页 序列表1页 附图7页 CN 113549143 B 2022.05.27 CN 113549143 B 1.一种抗肿瘤多肽 Bax‑BH3， 其特征在于， 其氨基酸序列如SEQ  ID No.1所示。 2.一种抗肿瘤药物， 其特 征在于， 包括权利要求1所述的抗肿瘤多肽 Bax‑BH3和辅料。 3.一种荧光高分子纳米胶束， 其特征在于， 包括权利要求1所述的抗肿瘤多肽Bax ‑BH3 和高分子载体； 所述高分子载体为嵌段共聚物精氨酰甘氨酰天冬氨酸 ‑聚N‑(2‑羟丙基)甲基丙烯酰 胺‑嵌段聚甲基丙烯酰罗丹明B ‑聚甲基丙烯酸甲酯RGD ‑PHPMA‑b‑Poly(MMA ‑alt‑(Rhob‑ MA))； 所述的高分子载体的制备 方法， 包括以下步骤： 1)对罗丹明B进行还原， 合成还原态的罗丹明B， 用甲基丙烯酰氯对罗丹明B进行功能化 修饰获得甲基丙烯基功能化罗丹明B  Rhob‑MA； 2)MMA、 4‑氰基戊酸二硫代苯甲酸CPADB、 偶氮二异丁腈AIBN和Rhob ‑MA； 以THF为反应溶 剂， 冻融脱气三次后N2保护， 70℃反应6h， 反获得的产物石油醚沉淀， 真空干燥得到纯化后 产物聚甲基丙烯酰罗丹明B ‑聚甲基丙烯酸甲酯 Poly(MMA‑alt‑(Rhob‑MA))； 3)HPMA、 AIBN、 Poly(MMA ‑alt‑(Rhob‑MA))， 以THF为反应溶剂， 冻融脱气三次后N2保护， 70℃反应12h， 反应后产物乙醚沉淀， 真空干燥得到纯化后产物PHPMA ‑b‑Poly(MMA ‑alt‑ (Rhob‑MA))； 4)NHS、 EDC和PHPMA ‑b‑Poly(MMA‑alt‑(Rhob‑MA))， 以MES缓冲液为反应溶剂， 20～25℃ 反应24h； 反应产物干燥后加入THF过滤， 收集滤液， 得到纯化后的产物NHS ‑PHPMA‑b‑Poly (MMA‑alt‑(Rhob‑MA))； 5)NHS‑PHPMA‑b‑Poly(MMA ‑alt‑(Rhob‑MA))、 精氨酰甘氨酰天冬氨酸RGDfK、 以MES缓冲 液为反应溶剂， 20～25℃反应24h； 反应产物透析纯化得到纯化后的产物溶液， 将产物溶液 冻干， 得到纯化后的RGD ‑PHPMA‑b‑Poly(MMA‑alt‑(Rhob‑MA))。 4.权利要求3所述的荧 光高分子纳米胶束的制备 方法， 包括以下步骤： 1)将嵌段共聚物RGD ‑PHPMA‑b‑Poly(MMA ‑alt‑(Rhob‑MA))溶解于有机溶剂中获得嵌段 共聚物溶 液； 2)将所述嵌段共聚物溶液滴加至抗肿瘤多肽Bax ‑BH3的水溶液中获得荧光 高分子纳米 胶束。 5.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 步骤1)中所述嵌段共聚物溶液的浓度 为2～3mg/mL， 所述有机溶剂为四氢呋喃。 6.根据权利要求4或5所述的制备方法， 其特征在于， 步骤2)中所述的抗肿瘤多肽Bax ‑ BH3的水溶液的浓度为0.3～0.7mg/mL； 步骤2)中所述滴加过程中对多肽溶液进行超声处 理， 每一滴所述嵌段共聚物溶 液的体积为5～15 μL。 7.权利要求1所述的抗肿瘤多肽Bax ‑BH3、 权利要求2所述的抗肿瘤药物、 权利要求3所 述的荧光高分子纳米胶束、 权利要求4～6任意一项 所述制备方法制备获得的荧光高分子纳 米胶束在制备预防和/或治疗因Bcl ‑2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的疾病的药物 中的应用； 所述疾病为恶性肿瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113549143 B 2一种抗肿瘤多肽Bax ‑BH3、 荧光高分子纳米胶束及其制备方 法 和应用 技术领域 [0001]本发明属于医药技术领域， 尤其涉及一种抗肿瘤多肽Bax ‑BH3、 荧光高分子纳 米胶 束及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]细胞凋亡(Apoptosisis)是指 为维持内环境稳定， 由基因控制的细胞自主地、 有序 地死亡。 细胞凋亡与细胞坏死不同， 细胞凋亡并不是被动的过程， 而是主动过程， 它涉及一 系列基因的激活、 表达以及调控等作用， 它并不是病理条件下， 自体损伤的一种现象， 而是 为更好地适应生存环 境而主动争取的一种死亡过程。 细胞凋亡过程对于多细胞动物的发育 至关重要， 正常凋亡的失调往往会导致机体产生多种疾病， 如癌症、 神经退行性疾病和自身 免疫性疾病。 对于肿瘤 细胞而言， 它 们可以通过修改正常凋亡 过程从而实现永生。 [0003]在调节细胞凋亡的过程中， 有很多种生物分子的参与， 例如Bcl ‑2家族蛋白。 这一 家族有众多成员， 如Mcl ‑1、 NR‑B、 A1、 Bcl ‑w、 Bcl‑x、 Bax、 Bak、 Ba d、 Bim等， 它们分别既有抗凋 亡作用， 也有促凋亡的作用。 多 数成员间有两个结构同源区域， 在介导成员之间的二聚体化 过程中起重要作用。 Bcl ‑2家族蛋白成员之间的二聚体化是成员之间功能实现或调节的重 要形式。 [0004]Bcl‑2associated  X protein(简称Bax蛋白)， 是Bcl ‑2家族蛋白中的促凋亡蛋白， 与细胞凋亡相关。 Bax蛋白平时存在于细胞质中， 一旦接收到死亡讯息， Bax会受到活化而转 移到粒线体外膜上， 接着Bax蛋白寡聚化后使粒线体外膜通透性改变， 释放线粒体中的Cyt   c， 从而引发细胞凋亡。 (Suzanne,Cory,Andrew,et  al.Targeting  BCL‑2‑like Proteins   to Kill Cancer Cells[J]Trends  in Cancer,2016,2(8):4 43.) [0005]Bcl‑2家族蛋白成员都含有1～4个Bcl ‑2同源结构域， 其中BH4是抗凋亡蛋白所特 有的结构域， BH3是与促进凋亡