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(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110930262.8 (22)申请日 2021.08.13 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113633660 A (43)申请公布日 2021.11.12 (73)专利权人 哈尔滨工程大 学 地址 150001 黑龙江省哈尔滨市南岗区南 通大街145号 (72)发明人 丁鹤 杨飘萍 贺飞 盖世丽 杨丹 刘志亮 冯莉莉 常金虎 (74)专利代理 机构 哈尔滨市松花江专利商标事 务所 23109 专利代理师 李红媛 (51)Int.Cl. A61K 33/26(2006.01)A61K 33/24(2019.01) A61K 47/69(2017.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 30/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) C01G 51/00(2006.01) 审查员 王斯慧 (54)发明名称 一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效 应的双金属纳米酶复合材 料的制备方法 (57)摘要 一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效 应的双金属纳米酶 复合材料的制备方法, 它涉及 一种纳米酶 复合材料的制备方法。 本发明的目的 是要解决现有肿瘤治疗中纳米酶催 化效率低, 肿 瘤微环境响应敏 感度低的问题。 方法: 一、 合成双 金属纳米粒子CoFe2O4; 二、 制备双金属纳米酶复 合材料; 三、 表面修饰, 得到 具有原位调节肿瘤微 环境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶 复合材料。 本 发明利用GOD酶活性和纳米酶的多元类酶活性原 位调节肿瘤微环境, 优化酶促反应条件, 最大化 地利用肿瘤微环境的内源性动力, 提高肿瘤治疗 效率。 本发 明可获得一种具有原位调节肿瘤微环 境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶复合材 料。 权利要求书2页 说明书10页 附图13页 CN 113633660 B 2022.11.04 CN 113633660 B 1.一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶复合材料的制备方法, 其特征在于该制备 方法具体是按以下步骤完成的: 一、 合成双金属纳米粒子 CoFe2O4: ①、 将钴源和铁源分别加入到溶剂中, 搅拌均匀, 得到混合溶 液A; 步骤一①中所述的钴 源为乙酰丙酮钴; 步骤一①中所述的铁源为乙酰丙酮铁; 步骤一①中所述的溶剂为 二苄醚、 三缩四乙二醇或十八烯; 步骤一①中所述的钴 源与铁源的质量比为1:(0.5~ 2); 步骤一①中所述的钴 源与铁源的总质量与溶剂的质量比为1:(5 0~80); 步骤一③中所述的双金属纳米粒子 CoFe2O4的粒径为3nm~5nm; ②、 将混合溶液A置于三口圆底烧瓶中, 再抽真空, 再在磁力搅拌的条件下将混合溶液A 升温至90℃~120℃, 再在磁力搅拌和温度为90℃~120℃下反应, 得到混合溶 液B; ③、 向混合溶液B中通入氮气, 再将混合溶液B升温至260℃~298℃, 再在260℃~298℃ 下反应, 冷却至室温, 得到反应产物 Ⅰ; 将反应产物 Ⅰ进行离心, 去除离心液, 得到固体物质; 对固体物质进行清洗, 再干燥, 得到双金属纳米粒子 CoFe2O4; 二、 制备双金属纳米酶复合材 料: ①、 首先将三乙醇胺溶解到去离子水中, 然后在 75℃~80℃下磁力搅拌20min~40min, 再加入十六烷基三甲基溴化铵, 磁力搅拌0.8h~1.2h, 再滴加原硅酸四乙酯, 再磁力搅拌 10h~12h, 得到反应产物 Ⅱ; 对反应产物 Ⅱ进行离心, 再清洗, 最后干燥, 得到枝装介孔硅; ②、 将双金属纳米粒子CoFe2O4均匀分散到正己烷中, 再加入枝装介孔硅, 再在 30℃~60 ℃下搅拌反应, 得到反应产物 Ⅲ; 对反应产物 Ⅲ进行离心, 收集固体物质, 得到DMSN@C oFe2O4 纳米粒子; ③、 将DMSN@CoFe2O4纳米粒子分散于磷酸盐缓冲液中, 再加入1 ‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙 基)碳酰二亚胺盐酸盐, 室温下搅拌0.4h~0.6h, 再加入葡萄糖氧化酶, 避光室温搅拌10h~ 12h, 得到反应产物 Ⅳ; 对反应产物 Ⅳ进行离心, 收集 固体物质, 得到DMSN@CoFe2O4/GOD纳米 复合材料; 三、 表面修饰: 将DMSN@CoFe2O4/GOD纳米复合材料和无水乙醇加入到十四醇中, 再在温度为30℃~40 ℃下搅拌10h~12h, 得到 反应产物Ⅴ; 对反应产 物Ⅴ进行离心, 得到具有原位调节肿瘤微环 境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶复合材 料。 2.根据权利要求1所述的一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶 复合材料的制备方法, 其特征在于步骤一 ②中所述的反应的时间为20min~60min; 步骤一 ②中所述的升温速度为3℃/min~10℃/min; 步骤一 ②中所述的磁力搅拌的转速200r/min ~400r/min。 3.根据权利要求1所述的一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶 复合材料的制备方法, 其特征在于步骤一 ③中所述的升温速度为3℃/min~10℃/ min; 步骤 一③中所述的反应的时间为20min~60min; 步骤一 ③中所述的离心速度为12000r/min, 离 心时间为10min~15min; 步骤一 ③中首先使用去离子水对固体物质清洗3次~5次, 再使用 无水乙醇对固体物质清洗3次~5次; 步骤一 ③中所述的干燥的温度为80℃, 干燥的时间为权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 113633660 B 28h~12h。 4.根据权利要求1所述的一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶 复合材料的制备方法, 其特征在于步骤二 ①中所述的三乙醇胺的质量与去离子水的体积比 为(0.06g~0.10g):(5mL~10mL); 步骤二 ①中所述的十六烷基三甲基 溴化铵的质量与去离 子水的体积比为(350mg~400mg):(10mL~20mL); 步骤二 ①中所述的原硅酸四乙酯的质量 与去离子水的体积比为(1mg~5mg):(5mL~10mL); 步骤二 ①中所述的磁力搅拌的速度为 300r/min; 步骤二 ①中所述的离心速度为12 000r/min, 离心时间为10min~15min; 步骤二 ① 中首先使用去离子水对反应产 物Ⅱ清洗3次~5次, 再使用无水乙醇对固体物质清洗3次~5 次; 步骤二 ①中所述的干燥的温度为80℃, 干燥的时间为8h~12h 。 5.根据权利要求1所述的一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶 复合材料的制备方 法, 其特征在于 步骤二②中所述的双金属纳米粒子Co Fe2O4的质量与正己 烷的体积比为(5mg~10mg):(5mL~10mL); 步骤二 ②中所述的枝装介孔硅的质量与正己烷 的体积比为(10mg~20mg):(5mL~10mL); 步骤二 ②中所述的搅拌反应的时间为7h~8h, 搅 拌反应的速度为3 00r/min。 6.根据权利要求1所述的一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶 复合材料的制备方法, 其特征在于步骤二 ③中所述的DMSN@CoFe2O4纳米粒子的质量与磷酸 盐缓冲液的体积比为(5mg~10mg):(5mL~10mL); 步骤二 ③中所述的1 ‑乙基‑(3‑二甲基氨 基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的质量与磷酸盐缓冲液的体积比为(2mg~5mg):(5mL~10mL); 步骤二③中所述的葡萄糖氧化 酶的质量与磷酸盐缓冲液的体积比为(10mg~20mg):(5mL~ 10mL); 步骤二 ③中所述的搅拌的速度为3 00r/min。 7.根据权利要求1所述的一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶 复合材料的制备方法, 其特征在于步骤三中所述的DMSN@CoFe2O4/GOD纳米复合材料的质量 与十四醇的体积比为(10mg~20mg):(20mL~40mL); 步骤三中所述的无水乙醇与十 四醇的 体积比为(5~10):(20~40); 步骤三中所述的搅拌速度为3 00r/min。权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 113633660 B 3
专利 一种具有原位调节肿瘤微环境及抗肿瘤效应的双金属纳米酶复合材料的制备方法
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