(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110768592.1 (22)申请日 2021.07.07 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113480650 A (43)申请公布日 2021.10.08 (66)本国优先权数据 202110739693.6 2021.0 6.30 CN (73)专利权人 徐州医科 大学 地址 221004 江苏省徐州市 云龙区铜山路 209号徐州医科 大学 (72)发明人 王刚　郑骏年　李慧忠　曹培育　 王蒙　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 代理人 朱萍　孟祥斌 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)G01N 33/574(2006.01) (56)对比文件 CN 109880804 A,2019.0 6.14 CN 109468278 A,2019.0 3.15 CN 112063588 A,2020.12.1 1 US 2009142352 A1,20 09.06.04 US 2006024297 A1,20 06.02.02 Tang X, et al. .Administration of B7- H3 targeted c himeric antigen receptor-T cells induce regres sion of glioblastoma. . 《Signal Transduct Target Ther.》 .2021,第6 卷(第1期), Zhang Z, et al. .B7-H3-Targeted CAR-T Cells Exhibit Potent Antitumor Ef fects on Hematologic and So lid Tumors.. 《Mol Ther Oncolytics.》 .2020,第17 卷 Liu J, et al. .Targeti ng B7-H3 via chimeric antigen receptor T cel ls and bispecific k iller cell engagers augments antitumor respo nse of cytotoxic lymphocytes. . 《J Hemato l Oncol.》 .2021,第14 卷(第1期), 审查员 张临政 (54)发明名称 一种全人源靶向CD276的CAR-T细胞的制备 方法及应用 (57)摘要 本发明提供了一种全人源靶向CD276的CAR ‑ T细胞的制备方法及其应用。 本发明制备的靶向 CD276的CAR ‑T细胞对多种实体瘤细胞具有杀伤 作用， 杀伤活性高， 并且安全有效， 可用于肾癌、 肺癌、 肝癌、 神经胶质瘤、 卵巢癌、 乳腺癌等的免 疫细胞治 疗。 权利要求书4页 说明书12页 序列表16页 附图6页 CN 113480650 B 2022.01.28 CN 113480650 B 1.一种特异性结合CD276的分离的抗体， 包括重链可变区和轻链可变区； 其中， 重链可 变区包括： VH ‑CDR1、 VH‑CDR2、 VH‑CDR3； 轻链可变区包括： VL ‑CDR1、 VL‑CDR2、 VL‑CDR3； VH‑CDR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO:1所示； VH‑CDR2的氨基酸序列如SEQ  ID NO:2所示； VH‑CDR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO:3所示； VL‑CDR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO:4所示； VL‑CDR2的氨基酸序列如SEQ  ID NO:5所示； VL‑CDR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO:6所示。 2.根据权利要求1所述的抗体， 其特征在于， 所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID  NO:7所示； 所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO:8所示。 3.根据权利要求1所述的抗体， 其特 征在于， 所述 抗体是scFv。 4.根据权利要求1所述的抗体， 其特 征在于， 所述 抗体为全人源抗体。 5.编码权利要求1 ‑4中任一项所述的抗体的核酸分子、 含有所述核酸分子的重组载体 或含有所述核酸分子或所述重组载体的重组宿主细胞。 6.一种制备方法， 所述制备方法包括： 权利要求5所述的重组载体的制备方法或权利要 求5所述的重组宿主细胞的制备 方法； 所述重组载体的制备方法包括如下步骤： 将编码权利要求1 ‑4中任一项所述的抗体的 核酸分子克隆到载体中， 获得重组载体； 所述重组宿主细胞的制备方法包括如下步骤： 将编码权利要求1 ‑4中任一项所述的抗 体的核酸分子或权利要求5所述的重组载体导入宿主细胞中， 获得 所述重组宿主细胞。 7.一种组合物或试剂 盒， 所述组合物或试剂 盒包括权利要求1 ‑4中任一项所述的抗体、 权利要求5所述的核酸分子、 权利要求5所述的重组载体或权利要求5所述的重组宿主细胞。 8.根据权利要求7所述的组合物或试剂盒， 其特征在于， 所述组合物包括免疫缀合物、 抗体药物、 细胞 药物、 核酸药物、 嵌合 抗原受体。 9.根据权利要求8所述的组合物或试剂 盒， 其特征在于， 所述嵌合抗原 受体包括权利要 求3所述的scFv。 10.根据权利要求9所述的组合物或试剂盒， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体还包括跨 膜区、 胞内信号传导结构域。 11.根据权利要求10所述的组合物或试剂 盒， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体还包括铰 链区。 12.根据权利要求11所述的组合物或试剂 盒， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体还包括共 刺激结构域。 13.根据权利要求12所述的组合物或试剂 盒， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体还包括信 号肽。 14.根据权利要求12所述的组合物或试剂 盒， 其特征在于， 所述共刺激结构域包括以下 分子的胞内信号传导结构域： CD27、 CD28、 4 ‑1BB、 OX‑40、 CD30、 CD40、 PD ‑1、 ICOS、 LFA ‑1、 CD‑ 2、 CD7、 LIGHT、 NKG2C或B7 ‑H3。 15.根据权利要求14所述的组合物或试剂盒， 其特征在于， 所述共刺激结构域是4 ‑1BB 的胞内信号传导结构域， 其包 含如SEQ ID NO:29所述的氨基酸序列。权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 113480650 B 216.根据权利要求11所述的组合物或试剂 盒， 其特征在于， 所述铰链区和和跨膜区包括 以下分子的铰链区和和跨膜区： IgG1、 IgG4、 CD8α、 CD28、 IL ‑2受体、 IL ‑7受体、 IL ‑11受体、 PD‑1或CD34。 17.根据权利要求16所述的组合物或试剂盒， 其特征在于， 所述铰链区和和跨膜区是 CD8α 的铰链区和 和跨膜区。 18.根据权利要求17所述的组合物或试剂盒， 其特征在于， CD8α 的铰链区包含如SEQ  ID  NO: 25所述的氨基酸序列。 19.根据权利要求17所述的组合物或试剂盒， 其特征在于， CD8α 的跨膜区包含如SEQ  ID  NO: 27所述的氨基酸序列。 20.根据权利要求10所述的组合物或试剂 盒， 其特征在于， 所述胞内信号转导结构域包 括以下分子的胞内信号传导结构域： FcγR、 Fc εR、 Fcα R、 FcRn、 CD3、 CD3ζ、 CD3γ、 CD3δ、 CD3 ε、 CD4、 CD5、 CD8、 CD21、 CD22、 CD28、 CD32、 CD40L、 CD45、 CD66d、 CD79a、 CD79b、 CD80、 CD86、 CD278、 CD247ζ、 CD247η、 DAP10、 DAP12、 FYN、 LAT、 Lck、 MAPK、 MHC复合物、 NFAT、 NF ‑κB、 PLC‑γ、 iC3b、 C3dg、 C3d或Zap70 。 21.根据权利要求20所述的组合物或试剂 盒， 其特征在于， 所述胞内信号转导结构域是 CD3ζ 胞内信号 转导结构域， 其包 含如SEQ IDNO: 31所述的氨基酸序列。 22.根据权利要求13所述的组合物或试剂 盒， 其特征在于， 所述信号肽包括膜蛋白质的 信号肽。 23.根据权利要求22所述的组合物或试剂盒， 其特征在于， 所述信号肽包括T细胞受体 的α 链及β 链、 CD3ζ、 CD28、 CD3 ε、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD37、 CD64、 CD80、 CD86、 CD134、 CD137、 ICOS、 CD154、 GITR、 免疫球蛋白重链或免疫球蛋白轻链的信号肽。 24.根据权利要求23所述的组合物或试剂盒， 其特征在于， 所述信号肽包含如SEQ   IDNO: 23所示的氨基酸序列。 25.根据权利要求8 ‑24任一项所述的组合物或试剂盒， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体 的氨基酸