(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110739072.8 (22)申请日 2021.06.30 (66)本国优先权数据 202110691148.4 2021.0 6.22 CN (71)申请人 合肥瀚科迈博生物技 术有限公司 地址 230088 安徽省合肥市高新区海关 路9 号安科生物 A座601室 (72)发明人 程联胜　牛立文　朱敏　周鹏飞　 刘雯婷　张大艳　周维明　曾小丽　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 张立娜 (51)Int.Cl. C07K 14/705(2006.01) C07K 16/28(2006.01)C07K 19/00(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 15/13(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 33/574(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种与抗4-1BB抗体结合的抗原表位肽及其 抗原抗体复合物晶体 (57)摘要 本发明公开了一种 与抗4‑1BB抗体结合的抗 原表位肽及其抗原抗体复合物晶体。 本发明提供 了4‑1BB抗原表位肽， 为氨基酸序列如SEQ  ID  No.1的第39 ‑65位所示的多肽； 或者， 在此基础 上， 除了SEQ  ID No.1的第40位、 第49位、 第58位、 第60位、 第61位、 第62位、 第63位和第64位外， 其 他位点进行一个或多个氨基酸残基的保守替换 后得到的具有相同功能的多肽。 本发 明发现了新 的4‑1BB抗原表位肽， 对于后续相关抗体的制备， 以及4‑1BB表达异常相关疾病的诊断、 防治均具 有重要意 义。 权利要求书2页 说明书13页 序列表4页 附图7页 CN 115505036 A 2022.12.23 CN 115505036 A 1.4‑1BB抗原表位肽， 为如下I或I I： I： 氨基酸序列如SEQ  ID No.1的第39 ‑65位所示的多肽； II： 在I所示多肽的基础上， 除了SEQ  ID No.1的第40位、 第49位、 第58位、 第60位、 第61 位、 第62位、 第63位和第64位外， 其他位点进 行一个或多个氨基酸残基的保守替换后得到的 具有相同功能的多肽。 2.4‑1BB抗原表位肽， 其特征在于： 所述4 ‑1BB抗原表位肽为能够与ZG033抗体或其抗原 结合片段相结合的多肽； 所述ZG033抗体的重链可变 区中HCDR1、 HCDR2和HCDR3的氨基酸序 列依次如SEQ  ID No.2自N端起第31 ‑35位、 第50 ‑65位、 第98 ‑106位所示； 所述ZG033抗体的 轻链可变区中LCD R1、 LCDR2和LCDR3的氨基酸序列依次如SEQ  ID No.3自N端起第24 ‑34位、 第50‑56位、 第89 ‑97位所示； 所述4‑1BB抗原表位肽与所述ZG033抗体或其抗原结合片段的结合位点为： SEQ  ID  No.2的第31位丝氨 酸、 第32位 酪氨酸、 第50位的缬氨 酸、 第52位的色氨酸、 第54位的甘氨酸、 第100位的甘氨酸、 第101位的苏氨酸、 第102位的色氨酸， 以及SEQ  ID No.3的第49位酪氨 酸、 第94位亮氨酸、 第96位色氨酸。 3.根据权利要求2所述的4 ‑1BB抗原表位肽， 其特 征在于： 所述4‑1BB抗原表位肽依靠精氨酸、 苏氨酸和半胱氨酸分别与SEQ  ID No.2的第100位 的甘氨酸、 第101位的苏氨酸和第102位的色氨酸形成氢键； 所述4‑1BB抗原表位肽依靠精 氨酸与SEQ  ID No.2的第32位酪氨酸形成氢键； 所述4‑1BB抗原表位肽依靠天 冬酰胺与SEQ  ID No.3的第49位酪氨酸形成氢键； 所述4‑1BB抗原表位肽依靠精 氨酸、 甘氨酸与SEQ  ID No.2的第31位丝氨酸形成氢键； 所述4‑1BB抗原表位肽依靠天 冬氨酸与SEQ  ID No.2的第54 位的甘氨酸形成氢键； 所述4‑1BB抗原表位肽依靠脯氨酸、 半胱氨酸、 异亮氨酸与SEQ  ID No.2的第50位 的缬 氨酸、 第52位的色氨酸、 第101位的苏氨 酸、 第102位的色氨酸， 以及SEQ  ID No.3的第94位亮 氨酸、 第96位色氨酸形成疏 水相互作用。 4.一种抗原抗体复合物晶体， 由4 ‑1BB抗原胞外区与ZG033抗体的抗原结合片段Fab组 成； 所述4 ‑1BB抗原胞外区的氨基酸序列如SEQ  ID No.1的第24 ‑186位或第24 ‑194位所示； 所述ZG033抗体的抗原结合片段Fab的重链氨基酸序列如SEQ  ID No.2的第1 ‑215位或SEQ   ID No.2所示， 轻链 氨基酸序列如SEQ  ID No.3所示； 所述抗原抗体复合物晶体结构参数如下： 所述抗原抗体复合物晶体属于P1空间群； 分辨率范围： 19.91 ‑2.30埃； 晶胞参数为： a＝ 60.021埃， b＝65.913埃， c＝83.643埃； α ＝90度， β ＝82.495度， γ＝74.822度； 一个不对称 单位分子包含2个分子， 每个分子均为所述4 ‑1BB抗原胞外区及所述ZG033抗体的抗原结合 片段Fab的复合物； 工作R因子和自由R因子分别为21.6％和27.49％； 键长均方根偏差为 0.004埃， 键角均方根偏差为0.62度； 溶剂含量 为56.3％。 5.权利要求1 ‑3中任一所述的4 ‑1BB抗原表位肽在如下任一中的应用： P1、 作为免疫原制备抗 4‑1BB抗体； P2、 制备用于检测ZG033抗体或其抗原结合片段的产品； 所述ZG033抗体的重链可变区 中HCDR1、 HCDR2和HCDR3的氨基酸序列依次如SEQ  ID No.2自N端起第31 ‑35位、 第50 ‑65位、 第98‑106位所示； 所述ZG033抗体的轻链可变区中LCD R1、 LCDR2和LCD R3的氨基酸序列依次权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115505036 A 2如SEQ ID No.3自N端起第24 ‑34位、 第50‑56位、 第89 ‑97位所示； P3、 制备用于诊断4 ‑1BB表达异常所致疾病产品； P4、 制备用于治疗和或预防4 ‑1BB表达异常所致疾病产品。 6.以权利要求1 ‑3中任一所述的4 ‑1BB抗原表位肽作为靶标的具有如下功能的产品： Q1、 诊断4 ‑1BB表达异常所致疾病； Q2、 治疗和或预防4 ‑1BB表达异常所致疾病。 7.根据权利要求6所述的产品， 其特征在于： 所述产品为以权利要求1 ‑3中任一所述的 4‑1BB抗原表位肽作为免疫原制备 得到的抗体。 8.如下任一 生物材料： (A1)编码权利要求1 ‑3中任一所述的4 ‑1BB抗原表位肽的核酸分子； (A2)含有(A1)所述核酸分子的表达盒、 重组载体或重组细胞。 9.一种制备权利要求 4所述抗原抗体复合物晶体的方法， 包括如下步骤： (B1)将所述4 ‑1BB抗原胞外区与所述ZG033抗体的抗原结合片段Fab按照质量比2:1的 比例混合， 制备 得到抗原 ‑抗体复合物蛋白溶 液， 以备步骤(B2)制晶； (B2)利用含有体积 百分含量为18％的PEG4000的0.1M  Tris(pH 8.0)溶液作为沉淀剂， 通过气相扩散法， 进行晶体生长， 从而得到 权利要求 4所述抗原抗体复合物晶体。 10.根据权利要求9所述方法， 其特征在于： 步骤(B1)中， 所述抗原 ‑抗体复合物蛋白溶 液的浓度不低于15mg/mL。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115505036 A 3