(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110777881.8 (22)申请日 2021.07.09 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113274377 A (43)申请公布日 2021.08.20 (66)本国优先权数据 202011451184.5 2020.12.09 CN (73)专利权人 常州市第二人民医院 地址 213100 江苏省常州市武进区滆湖中 路68号 (72)发明人 高源　秦锡虎　汤黎明　 (74)专利代理 机构 济南市新图新夏天专利代理 事务所(普通 合伙) 37330 专利代理师 陈体芝(51)Int.Cl. A61K 31/19(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12Q 1/18(2006.01) C12Q 1/02(2006.01) G16B 50/00(2019.01) (56)对比文件 CN 106432173 A,2017.02.2 2 审查员 陈笑宇 (54)发明名称 一种R-2HG用于制备抑制肿瘤药物的应用 (57)摘要 本发明涉及肿瘤药物 技术领域， 尤其涉及一 种R‑2HG的应用， 其在制备抑制肿瘤药物中的应 用； 所述的抑制肿瘤药物为抑制胆管癌药物， 本 发明中R‑2HG通过改变信号传导而降低CCA细胞 增殖， 而ERα(雌激素通过雌激素受体α)改变 FTO/m6A甲基化的ERα/miR ‑16‑5p/YAP1信号传 导， 这项研究为由IDH1/2突变产生的R ‑2HG的抗 肿瘤分子机制提供了新颖的见解， 并可能有助于 开发更有效的新颖治疗策略， 以治疗 具有或不具 有IDH1/2突变的C CA。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 113274377 B 2022.11.25 CN 113274377 B 1.一种R‑2HG的应用， 其特 征在于， 其在制备胆管癌细胞体外增殖抑制剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113274377 B 2一种R‑2HG用于制备抑制肿瘤药物的应用 技术领域 [0001]本发明涉及肿瘤药物技术领域， 尤其涉及一种R ‑2HG用于制备抑制肿瘤药物的应 用。 背景技术 [0002]胆管癌(Cholangiocarcinoma,CCA)是起源于胆道上皮细胞的一类恶性肿瘤， 是第 二大最常见的原发性肝恶性肿瘤。 根据解剖结构， CCA分为肝内CCA(ICC)和肝外CCA(ECC)。 无痛性黄疸是门诊病 人的主要原因。 其主要特征是预后差和中位生存期短(约一年)。 完整 的手术切除与组织学阴性切除切缘和肝移植仍被认为是潜在治愈性治疗的主要手段。 由于 对肿瘤生物学和分子发病机制的进一步了解， 致癌作用的特定基因排列已达成共识， 而基 因组分析也揭示了CCA中的遗传突变谱。 这些基因异常中， 在神经胶质瘤、 急性髓细胞性白 血病(AML)、 软骨肉瘤和CCA的研究发现IDH1/2突变在CCA的发生和预后中发挥了重要作用。 进一步研究发现， 由突变的IDH1/2在三羧酸(TCA)循环中产生的(R) ‑2‑羟基戊二酸(R ‑2HG) 抑制了经典α ‑酮戊二酸( α ‑KG)依赖性双加氧酶的活性， 改变了表观遗传， 细胞外基质成熟 和细胞信号传导。 功能研究还发现， R ‑2HG可促进癌变， 被认为是α ‑KG的竞争性 合成代谢物。 [0003]一种副作用较小的药品， 不但能够抗包括胆管癌在内的肿瘤还能使患者减少痛苦 是十分具有实用价 值的。 发明内容 [0004]本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点， 而提出的一种R ‑2HG用于制备 抑制肿瘤药物的应用。 [0005]为了实现上述目的， 本发明采用了如下技 术方案： [0006]一种R‑2HG的应用， 其在制备抑制肿瘤药物中的应用； 所述的抑制肿瘤药物为抑制 胆管癌药物。 [0007]优选的， 一种验证R ‑2HG抑制胆管癌细胞增殖的方法， 包括以下步骤： [0008]S1： 先将2个C CA细胞系经 过300 μM R‑2HG处理48小时， 然后进行MT T细胞增殖实验； [0009]S2： 验证内源性R ‑2HG与外源性R ‑2HG的结果， 应用慢病毒系统在QBC939细胞系中 建立过表达的野生型IDH1和突变IDH1(R 132H)， 进行MT T细胞增殖实验和/或菌落形成实验； [0010]S3： 运用CRISPR/Cas9基因组编辑技术， 在QBC939细胞系中构建杂合IDH1R132H突 变(IDH1R132H/WT)， 通过MTT细胞增殖实验和集落形成试验检验IDH1R132H/WTQBC939细胞中的 内源性R‑2HG功能； [0011]S4： 检索GEO数据库， 获得一个IDH1/2突变的CCA肿瘤样本的微阵列数据集 (GSE107102)， 通过针对IDH1/2突变组和野生组的数据比对， 获得了738个差异基因， 随后， 通过在线通路富集分析工具DAVID6.8， 获得了排名前20的差异 通路， 最后， 选择同细胞增殖 相关联的四个通路， 筛选出共 同的差异基因： ERα、 HIF ‑1α和GJA1， 利用TCGA中临床样本数 据， 验证肿瘤预后同这3个差异基因的相关性；说　明　书 1/5 页 3 CN 113274377 B 3