(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110763406.5 (22)申请日 2021.07.0 6 (66)本国优先权数据 202010648451.1 2020.07.07 CN (71)申请人 深圳市菲鹏生物治 疗股份有限公司 地址 518054 广东省深圳市前海深港合作 区前湾一路1号A栋201室 （入驻深圳市 前海商务秘书 有限公司） (72)发明人 王保垒　都晓龙　彭亮　王先进　 叶立军　 (74)专利代理 机构 北京清亦华知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11201 代理人 赵丽婷 (51)Int.Cl. C12N 5/0783(2010.01)C12N 7/01(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 T淋巴细胞及其应用 (57)摘要 本发明提出了一种T淋巴细胞。 该T淋巴细胞 共表达融合蛋白以及嵌合抗原受体， 所述嵌合抗 原受体识别肿瘤抗原， 其中， 所述嵌合抗原受体 包括： 胞外区； 跨膜区， 所述跨膜区与所述胞外区 相连， 并且嵌入到所述转基因淋巴细胞的细胞膜 中； 胞内区， 所述胞内区与所述跨膜区相连， 并且 所述胞内区包括免疫共刺激分子胞内段； 所述融 合蛋白包括： 免疫检查点单链抗体和T细胞激活 分子。 该T淋巴细胞作用对肿瘤的杀伤更为有效、 长效， 安全性更高。 权利要求书3页 说明书16页 序列表11页 附图9页 CN 113913379 A 2022.01.11 CN 113913379 A 1.一种T淋巴细胞， 其特征在于， 所述T淋巴细胞共表达 融合蛋白以及嵌合抗原受体， 其 中， 所述嵌合 抗原受体包括： 胞外区， 所述胞外区包括单链抗体的重链可变区和轻链可变区以及CD8铰链区， 所述单 链抗体特异性识别肿瘤抗原； 跨膜区， 所述跨膜区与所述胞外区相连， 所述跨膜区包括CD8的跨膜段， 并且嵌入到所 述T淋巴细胞的细胞膜中； 胞内区， 所述胞内区与所述跨膜区相连， 并且所述胞内区包括4 ‑1BB的胞内段以及CD3ζ 链； 所述融合蛋白包括： 免疫检查 点单链抗体和T细胞激活分子 。 2.根据权利要求1所述的T淋巴细胞， 其特征在于， 所述免疫检查点包括选自PD ‑1、 PD‑ L1、 CTLA‑4、 TIM3、 LAG3、 BTLA和TIGIT至少之一； 任选地， 所述T细胞激活分子包括选自IL2、 IL7、 IL9、 IL12、 IL15、 IL18和IL21的至少之 一。 3.根据权利要求1所述的T淋巴细胞， 其特征在于， 所述免疫检查点为PD ‑1， 所述T细胞 激活分子为 IL21； 任选地， 所述IL21的C端与PD ‑1单链抗体 的N端相连； 优选地， 所述PD ‑1单链抗体 的C端 与所述IL21的N端相连。 4.根据权利要求1所述的T淋巴细胞， 其特征在于， 所述融合蛋白进一步包括连接肽， 所 述连接肽设置 于所述免疫检查 点单链抗体和T细胞激活分子之间； 任选地， 所述连接肽具有SEQ  ID NO:1所示的氨基酸序列； 优选地， 所述连接肽的N端与所述免疫检查点单链抗体的C端相连， 所述连接肽的C端与 所述T细胞激活分子的N端相连。 5.根据权利要求1所述的T淋巴细胞， 其特征在于， 所述融合蛋白具有SEQ  ID NO:2或 SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。 6.一种慢病毒， 其特 征在于， 所述慢病毒携带 下列核酸分子： (a)编码融合蛋白的核酸分子， 所述融合蛋白包括： 免疫检查点单链抗体和T细胞激活 分子； (b)编码嵌合 抗原受体的核酸分子， 所述嵌合 抗原受体的胞外区识别肿瘤抗原。 7.根据权利 要求6所述的慢病毒， 其特征在于， 所述免疫检查点为PD ‑1， 所述T细胞激活 分子为IL21， 所述融合蛋白具有SEQ  ID NO:2或3所示的氨基酸序列； 任选地， 所述肿瘤抗原为CD19， 所述嵌合抗原受体具有SEQ  ID NO:4所示的氨基酸序 列； 任选地， 所述编码融合蛋白的核酸分子具有SEQ  ID NO:5或6任一所示的核苷酸序列； 任选地， 所述编码嵌合 抗原受体的核酸分子具有SEQ  ID NO:7所示的核苷酸序列。 8.一种慢病毒， 其特征在于， 所述慢病毒携带具有SEQ  ID NO： 8或9所示核苷酸序列的 核酸分子 。 9.一种转基因淋巴细胞， 其特征在于， 所述转基因淋巴细胞共表达融合蛋白以及嵌合 抗原受体， 所述嵌合 抗原受体识别肿瘤抗原，权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 113913379 A 2其中， 所述嵌合 抗原受体包括： 胞外区； 跨膜区， 所述 跨膜区与所述胞外区相连， 并且嵌入到所述 转基因淋巴细胞的细胞膜中； 胞内区， 所述胞内区与所述 跨膜区相连， 并且所述胞内区包括免疫共刺激分子胞内段； 所述融合蛋白包括： 免疫检查 点单链抗体和T细胞激活分子 。 10.根据权利要求9所述的转基因淋巴细胞， 其特征在于， 所述免疫共刺激分子胞内段 独立地选自4‑1BB、 OX‑40、 CD40L、 CD27、 CD3 0、 CD28、 CD3以及他们的衍 生物的至少一种； 优选地， 所述免疫共刺激分子胞内段 是4‑1BB、 CD3的胞内段； 任选地， 所述淋巴细胞 是CD3+T淋巴细胞； 任选地， 所述淋巴细胞 是CD8+T淋巴细胞； 任选地， 所述淋巴细胞 是自然杀伤细胞； 任选地， 所述淋巴细胞 是自然杀伤T细胞； 任选地， 所述免疫检查点包括选自PD ‑1、 PD‑L1、 CTLA‑4、 TIM3、 LAG3、 BTLA和TIGIT的至 少之一； 任选地， 所述T细胞激活分子包括选自IL2、 IL7、 IL9、 IL12、 IL15、 IL18与IL21的的至少 之一； 优选地， 所述免疫检查 点为PD‑1， 所述T细胞激活分子为 IL21； 任选地， 所述 IL21的C端与P D‑1单链抗体的N端相连； 优选地， 所述P D‑1单链抗体的C端与所述 IL21的N端相连； 任选地， 所述融合蛋白进一步包括连接肽， 所述连接肽设置于所述免疫检查点单链抗 体和T细胞激活分子之间； 任选地， 所述连接肽具有SEQ  ID NO:1所示的氨基酸序列； 优选地， 所述连接肽的N端与所述免疫检查点单链抗体的C端相连， 所述连接肽的C端与 所述T细胞激活分子的N端相连； 任选地， 所述融合蛋白具有SEQ  ID NO:2或SEQ  ID NO:3所示的氨基酸序列。 11.一种构建体， 其特 征在于， 所述构建体包括： 第一核酸分子， 所述第一核酸分子编码融合蛋白， 所述融合蛋白包括： 免疫检查 点单链抗体和T细胞激活分子； 第二核酸分子， 所述第二核酸分子编码嵌合抗原受体， 所述嵌合抗原受体识别肿瘤抗 原； 其中， 所述融合蛋白、 所述嵌合 抗原受体是如权利要求1～5、 9或10所限定的。 12.根据权利要求11所述的构建体， 其特征在于， 所述第一核酸分子、 所述第二核酸分 子被设置为在权利要求9或10所述的淋巴细胞中表达所述融合蛋白、 嵌合抗原受体， 并且所 述融合蛋白与嵌合 抗原受体呈非融合形式。 13.根据权利要求12所述的构建体， 其特 征在于， 进一 步包括： 第一启动子， 所述第一启动子与所述第一核酸分子可操作地连接； 以及 第二启动子， 所述第二启动子与所述第二核酸分子可操作地连接； 任选地， 所述第一启动子、 所述第二启动子分别独立地选自U6、 H1、 CMV、 EF ‑1、 LTR或RSV 启动子；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 113913379 A 3