(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110863803.X (22)申请日 2021.07.2 9 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113521252 A (43)申请公布日 2021.10.2 2 (73)专利权人 南开大学 地址 300350 天津市津南区海河教育园区 同砚路38号 (72)发明人 张强哲　李鲁远　赵灿灿　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 有限公司 1 1562 专利代理师 程小芳 (51)Int.Cl. A61K 38/19(2006.01) A61P 37/04(2006.01)A61P 35/00(2006.01) C12N 5/0786(2010.01) 审查员 白晓岩 (54)发明名称 TNFSF15蛋白作为巨噬细胞免疫增强剂的用 途及其活化方法 (57)摘要 本发明公开了一种TNFSF15蛋白作为巨噬细 胞免疫增强剂的用途及其活化方法， 属于医药技 术领域， 在该用途中， T NFSF15蛋白能在体外活化 小鼠M‑CSF或GM‑CSF诱导的骨髓来源巨噬细胞、 小鼠腹腔巨噬细胞和巨噬细胞系Raw264.7为M1 型， 增强其杀伤肿瘤细胞功能； 且在体内T NFSF15 蛋白能增强巨噬细胞免疫活性抑制肿瘤生长， 可 为日后临床肿瘤治 疗提供新的思路。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 113521252 B 2022.12.20 CN 113521252 B 1.TNFSF15蛋白在制备增强肿瘤内巨噬细胞M1极性的药物中的用途， 其特征在于， 所述 药物为将治疗有效量的TNFSF15蛋白与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合制成组合物； 所述巨噬细胞被活化 为M1型； 所述肿瘤为肺癌。 2.一种巨噬细胞在体外活化为M1型巨噬细胞的方法， 其特征在于， 所述方法具体包括 如下步骤： 将巨噬细胞于孵箱中培养12小时， 培养条件为37℃， 5％CO2， 吸弃培养基， 加入新 鲜含有TNFSF15蛋 白的极化培养基， 培养24h， 巨噬细胞向M1型活化； 所述TNFSF15蛋 白在极 化培养基中的浓度不高于10μg/mL； 所述巨噬细胞为小鼠巨噬细胞， 包括小鼠M ‑CSF或GM‑ CSF诱导的骨髓来源巨噬细胞、 小鼠腹腔巨噬细胞和/或巨噬细胞系Raw264.7。 3.根据权利 要求2所述的方法， 其特征在于， 所述极化培养基的组成为： RPMI1640+10％ FBS+3 μg/mL  TNFSF15蛋白； 所述极化培 养基中TNFSF15蛋白的浓度不高于10 μg/mL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113521252 B 2TNFSF15蛋白作 为巨噬细胞免疫增强剂的用途及其活化方 法 技术领域 [0001]本发明涉及医药技术领域， 特别是涉及一种TNFSF15蛋白作为巨噬细胞免疫增强 剂的用途及其活化方法。 背景技术 [0002]肿瘤是人类共同面临的重大疾病， 随着环境污染和生活压力的增加， 肿瘤发病率 更是逐年提升。 治疗肿瘤的方式主要有针对局部肿瘤的手术切除和放射线杀伤， 以及利用 化学药物杀伤肿瘤细胞的方法， 这些方法均有无法根除疾病、 易复发、 副作用大的缺点。 随 着现代免疫 学的发展， 人们认识到免疫功能的稳定在肿瘤发生、 发展、 转移、 逆转、 消退中占 有重要地位。 肿瘤是一个复杂的体系， 除了自身的肿瘤细胞， 其微环境还包含许多常驻细胞 类型， 如脂肪细胞、 成纤维细胞、 巨噬细胞、 嗜中性粒细胞和肥大细胞。 其中巨噬细胞在肿瘤 发生、 发展、 转移中常常起着至 关重要的作用。 巨噬细胞是机体固有免疫系统中重要的细胞 组分， 具有高度异质性。 根据激活方式不同， 本质上将巨噬细胞分为具有促炎、 杀伤作用的 经典激活巨噬细胞(Classically  activated  macrophages， M1型)和具有抑炎、 修复功能的 替代激活巨噬细胞(Alternative  activate d macrophages， M2型)。 病理学研究显示， 许多 疾病的发生与巨噬细胞极性有关， 如关节炎、 动态粥样 硬化、 肥胖等由于病灶部位有 大量M1 巨噬细胞， 其分泌的促炎因子， 加重机体损伤； 另外， 巨噬细胞M2极性过强， 也会引发哮喘、 纤维化、 寄生虫感染及肿瘤等疾病， 因此维持巨噬细胞M1和 M2极性的平衡对机体健康至关 重要。 大多 数肿瘤内的巨噬细胞呈现M2型， 促进肿瘤的生长， 因此敲除肿瘤内的巨噬细胞是 很多研究者尝试的方法。 研究表明通过巨噬细胞特异性受体CSF1R单克隆抗体或小型酪氨 酸激酶抑制剂阻断CSF1R信号传导， 继而消除肿 瘤的TAM， 可以抑制肿 瘤的生长。 此外， 阻断 CCR2受体， 阻止肿 瘤对巨噬细胞的招募， 从而减少肿 瘤内TAM， 也能达到抑制肿 瘤生长的目 的。 但这种 方法无法准确区分肿瘤中的所有巨噬细胞和其他区域巨噬细胞， 简单粗暴的消 除会引起副作用和长期毒性； 另外将巨噬细胞消除后， 肿瘤内的免疫系统缺少一项重要环 节， 不能激活体内其他免疫细胞。 因此将TAM转变为具有抗肿瘤功能的M1巨噬细胞被认 为是 一种更好的潜在治疗方法。 [0003]肿瘤坏死因子超家族成员15(Tumor  necrosis  factor superfamily ‑15， TNFSF15， 又称TL1A)， 是一种主要由成熟血管内皮细胞分泌的血管生长抑制因子。 研究发现 它不仅是一种 血管负调控因子， 能够抑制肿瘤内血管新生和肿瘤生长； 还可作为一种免疫 激活剂， 促进T细胞 活化和树突状细胞成熟。 目前， 尚未有关于TNFSF15和巨噬细胞之间关系 的报道。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种TNFSF15蛋白作为巨噬细胞免疫增强剂的用途及其活化 方法， 以解决上述现有技术存在的问题， 该蛋白能增强巨噬细胞M1极性， 使其具有杀伤作 用， 为肿瘤治疗提供治疗方案 。说　明　书 1/8 页 3 CN 113521252 B 3