ICS 65.020.01 CCS B 30 41 河 南 省 地 方 标 准 DB41/T 2188—2021 金银花组织培养育苗技术规程 2021 - 10 - 19 发布 2022 - 01 - 18 实施 河南省市场监督管理局 发 布 DB41/T 2188—2021 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 设施设备 ........................................................................... 1 5 组织培养 ........................................................................... 2 6 温室驯化 ........................................................................... 3 附录 A（资料性） 培养基成分 ........................................................... 4 I DB41/T 2188—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由河南省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：河南科技学院、封丘县金银花产业协会、安阳市农产品质量安全检测中心、河南 大学、新乡市正源农业科技有限公司、封丘县尔玉中药材有限公司。 本文件主要起草人：李勇超、杨靖、赵元增、王广军、王秀平、宋琳琳、李明亮、孙海燕、赵航、 李正晗、姚自动、王峰。 II DB41/T 2188—2021 金银花组织培养育苗技术规程 1 范围 本文件规定了金银花组织培养育苗的术语和定义、设施设备、组织培养和温室驯化。 本文件适用于金银花组织培养育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 LY/T 1882—2010 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 金银花 忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）。 3.2 组织培养 在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，在人工培养基和人工控制的环境中， 使其再生新植株的过程和技术。 3.3 外植体 用于植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。 3.4 初代培养 在组织培养过程中,最初建立的外植体无菌培养阶段。 3.5 继代培养 将初代培养获得的茎段或愈伤组织，通过分离切割接种在新的培养基中，从而获得大量无菌幼苗的 培养阶段。 4 设施设备 4.1 组织培养设施设备 4.1.1 基本要求 组织培养室选址应环境清洁，远离微粒和烟雾等污染源，水电供应充足，交通运输便利。 1 DB41/T 2188—2021 组织培养室包括洗涤室、灭菌室、培养基配制室、缓冲室、无菌接种室和无菌培养室等。 4.1.2 洗涤室设备 配备自动或半自动洗瓶机、水槽、收纳箱、量瓶架等。 4.1.3 灭菌室设备 配备高压蒸汽灭菌锅、器械消毒器、紫外线灯、烘干箱、微孔过滤器等。 4.1.4 培养基配制室设备 配备电子天平（0.0001 g,0.01 g）、酸度计、微波炉、冰箱等。 4.1.5 缓冲室设备 配备衣帽柜、风淋装置等。 4.1.6 无菌接种室设备 配备超净工作台、器械消毒器、酒精灯等。 4.1.7 无菌培养室设备 配备培养架、紫外灯、臭氧发生器、空气加湿器、除湿机、时控装置等。 4.2 温室驯化设施设备 日光温室，配备温湿度调节装置、光照控制装置、灌溉设备、栽培床、穴盘等。 5 组织培养 5.1 外植体取材与灭菌 5.1.1 外植体取材 选取生长健壮、无病虫害的金银花当年生嫩枝，截取长度为0.5 cm～3 cm的芽段，每个芽段包含1～ 3个腋芽。 5.1.2 外植体处理 将截取的芽段置于1%中性洗涤剂中浸泡10 min，再用自来水冲洗30 min。 5.1.3 外植体灭菌 在超净工作台内，将处理过的芽段置于无菌培养瓶中，加入2.5%次氯酸钠（按有效氯计）溶液浸泡 20 min，再用灭菌蒸馏水冲洗4次，以获得无菌的外植体用于接种。 5.2 培养基成分 芽段初代培养与继代培养所需培养基成分见附录A，培养基pH 5.8。 5.3 外植体的接种 将经过灭菌的芽段置于超净工作台内，无菌接种。 2 DB41/T 2188—2021 5.4 初代培养 外植体接种于300 mL～650 mL培养瓶中，每瓶分装培养基高度1.0 cm～1.5 cm，每10 mL培养基接 种1个芽段。置于无菌培养室中培养20 d～30 d。 培养室设置光照强度2000 lx～3000 lx，光照时间14 h/d，湿度60%，温度25 ℃±2 ℃。 5.5 继代培养 3 将初代培养获得的不定芽分割成1 cm 的不定芽块，按5.4的方法接种培养，扩繁获得大量的不定芽 块。 5.6 生根培养 从继代培养获得的不定芽块中分离高度≥2 cm的健壮不定芽，按5.4的方法接种培养，其中光照强 度设置为3000 lx。获得根芽齐全的金银花无菌幼苗。 6 温室驯化 6.1 将根芽齐全的无菌幼苗带瓶转移至温室中，日光锻炼5 d～7 d，然后开瓶锻炼3 d～5 d，及时加水 保湿。 6.2 将锻炼好的幼苗从培养瓶中取出，用自来水冲洗根部10 min，洗净根系附着的培养基，置于适宜浓 度的农用杀菌剂中，浸泡处理，然后定植于珍珠岩基质的穴盘中，喷水保湿。 3 DB41/T 2188—2021 A A 附 录 A （资料性） 培养基成分 金银花组织培养培养基成分见表A.1。 表A.1 金银花组织培养培养基成分表 培养基成分 无机成分 维生素 氨基酸 植物生长调节物质 附加物 4 初代培养基 继代培养基 生根培养基 mg/L mg/L mg/L 硝酸铵 NH4NO3 1650 1650 825 硝酸钾 KNO3 1900 1900 950 磷酸二氢钾 KH2PO4 170 170 85 七水硫酸镁 MgSO4•7H2O 370 370 185 二水氯化钙 CaCl2•2H2O 440 440 220 四水硫酸锰 MnSO4•4H2O 22.3 22.3 22.3 硼酸 H3BO3 6.2 6.2 6.2 七水硫酸锌 ZnSO4•7H2O 8.6 8.6 8.6 碘化钾 KI 0.83 0.83 0.83 二水钼酸钠 Na2MoO4•2H2O 0.25 0.25 0.25 五水硫酸铜 CuSO4•5H2O 0.025 0.025 0.025 六水氯化钴 CoCl2•6H2O 0.025 0.025 0.025 乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA•2H2O 37.3 37.3 37.3 七水硫酸亚铁 FeSO4•7H2O 27.8 27.8 27.8 肌醇 Myo-inositol 100 100 100 盐酸硫胺素 Thiamine HCl 0.1 0.1 0.1 盐酸吡哆醇 Pyridoxine HCl 0.5 0.5 0.5 烟酸 Nicotinic Acid 0.5 0.5 0.5 甘氨酸 Glycine 2 2 2 萘乙酸 NAA 0.1 0.05 0 1.0 1.0 0.1 0 0 1.5 六苄基腺嘌呤6-BA 吲哚丁酸 IBA 活性炭 Active Carbon 3000 0 0 蔗糖 Sucrose 30000 30000 30000 琼脂 Agar 4000 4000 4000