ICS 65.020 CCS B 15 吉 22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 3315—2021 利用共寄生繁育赤眼蜂生产技术规程 Code of practice for Trichogramma breeding by Symparasitism 2021 - 11 - 26 发布 2021 - 12 - 15 实施 吉林省市场监督管理厅  发 布 DB 22/T 3315—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的 规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：吉林农业大学（农业现代化综合技术研究所）。 本文件主要起草人：张雪、张俊杰、杜文梅、阮长春。 I DB 22/T 3315—2021 利用共寄生繁育赤眼蜂生产技术规程 1 范围 本文件确立了利用柞蚕卵共寄生繁育螟黄赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂的工艺流程，规定了生产计 划、工厂化生产等阶段的操作指示，描述了过程记录等追溯方法。 本文件适用于工厂化生产共寄生赤眼蜂。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 共寄生 symparasitism 以柞蚕卵为中间寄主，将螟黄赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂同时寄生在一粒柞蚕卵内的寄生方式。 4 利用共寄生繁育赤眼蜂程序的构成 利用共寄生繁育赤眼蜂生产分为 2 个阶段，准备工作阶段分为 6 个步骤，工厂化生产阶段分 为 7 个步骤。程序流程图如图 1 所示。 图1 5 共寄生繁育赤眼蜂工厂化生产流程 准备工作阶段 5.1 生产计划 每年的 11月 ～ 12 月份，根据虫情预测预报信息和实际情况，及时调整，主要内容包括： 1 DB 22/T 3315—2021 a) b) c) d) 5.2 所需厂房、设备； 蜂种、蚕茧等生产资料； 用工数量和时间； 组织生产及应急保障措施。 厂房及规模 按照 150 亿头共寄生赤眼蜂生产规模应包括： a) b) c) d) e) f) g) h) i) j) 5.3 2 蜂种繁育室不低于 40 m ； 2 暖茧车间不低于 300 m ； 2 采卵室不低于 50 m ； 2 洗卵室不低于 20 m ； 2 消毒室不低于 10 m ； 2 接种室不低于 10 m ； 2 暗室不低于 60 m ； 2 发育室不低于 50 m ； 2 保鲜冷藏室不低于 100 m ； 2 物品保存库不低于 20 m 。 设备 药品保存箱、搅拌器、脱水机、烘干机、柞蚕卵色选机、空调、排风机、点暖气、加湿器、温 湿度自控仪、电脑机打印机、发育盘架、手推运输车。 5.4 常用药品及材料 5.4.1 5.4.2 5.4.3 5.5 25 g/L ～ 30 g/L 苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）。 孔径为 0.15 mm 的纱网。 孔径为 2.00 mm 的纱网。 蜂种准备 5.5.1 蜂种采集 在靶标害虫产卵季节，于不同生境广泛采集被赤眼蜂寄生的靶标害虫卵，并做好标记，经室内 培养，筛选出寄生率高、适应性强的蜂种。 5.5.2 蜂种鉴定 根据雄性赤眼蜂外生殖器的形态特征进行种类鉴定，参照附录 A 执行。 5.5.3 蜂种纯化 对采自不同靶标害虫卵内的赤眼蜂进行如下筛选纯化： a) b) 2 在规格 10 mm × 70 mm 试管中投放米蛾卵 200 粒，再放入单头雌蜂，用棉球或纱布封口后置 于发育室； 发育条件：光照 16 h，（25 ± 1）℃、RH（75 ± 5）%；黑暗 8 h，（20 ± 1）℃、RH（75 ± 5）%； DB 22/T 3315—2021 c) 5.5.4 将确定的螟黄赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂分别合并，继续繁殖。 蜂种保存 纯化的蜂种，经 3 代 ～ 5 代筛选繁殖，建立实验种群后按下列方法保存： a) b) c) 5.6 将发育到幼虫中期的蜂种，置入 12 ℃、RH（75 ± 5）%的条件下，诱导滞育 30 d； 置入（3 ± 1）℃、RH（75 ± 5）% 的条件下，进行解除滞育 60 d ～ 90 d； 经 10 ℃ 2 d、15 ℃ 1 d 过渡后，按 5.5.3 b) 变温发育至出蜂。 柞蚕茧准备 5.6.1 备茧 5.6.1.1 备茧时期 在生产前 1 年的 11 月 ～ 12 月份开始按预定计划备茧。 5.6.1.2 茧质量 茧质量要求如下： a) b) c) d) e) f) g) 健康雌茧率 ≥ 90%； 雄茧率 ≤ 7%； 死伤茧率 ≤ 3%； 割口茧率 ≤ 8%； 发育蛹和嫩蛹 ≤ 5%； 茧层率 ≥ 10%，无薄皮茧、瘪茧； 茧干燥，未在 -3 ℃ 一下低温储存。 5.6.1.3 备茧数量 按每繁 150 亿头共寄生赤眼蜂用茧 18000 kg 计算。 5.6.2 蚕茧保存 5.6.2.1 5.6.2.2 5.6.2.3 5.6.2.4 6 保存温度：（3 ± 1）℃、RH （60 ± 5）%。 适当通风换气，保持空气含氧量。 防止接触有毒有害物质。 储存时间不低于 45 d。 工厂化生产 6.1 灭菌消毒 在生产前 1 周，将所有繁蜂车间及繁蜂工具，进行集中消毒。消毒方法为如下： a) b) c) 首先对消毒对象进行清水或 0.5% ～ 1% 氢氧化钠、1% 的漂白粉水冲洗； 用生石灰或石灰水对繁蜂车间喷刷覆盖； 将繁蜂工具等置于繁蜂车间内，用毒消散或硫磺等熏蒸消毒。保持室温 24 ℃以上，RH 75% 以 上，时间 24 h。 3 DB 22/T 3315—2021 6.2 种蜂准备 6.2.1 种蜂复壮 根据生产计划，定期对螟黄赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂种蜂以米蛾卵和柞蚕卵交替繁育复壮： a) b) 6.2.2 螟黄赤眼蜂： 1) 接蜂比例：米蛾卵蜂卵比未 1 ：80，柞蚕卵蜂卵比为 1：1； 2) 接蜂时间：1 d ～ 2 d； 3) 发育条件：同 5.5.3 b)； 4) 复壮周期：30 d ～ 40 d。 松毛虫赤眼蜂： 1) 接蜂比例：米蛾卵蜂卵比未 1 ：200，柞蚕卵蜂卵比为 1：1； 2) 接蜂时间：1 d ～ 2 d； 3) 发育条件：同 5.5.3 b)； 4) 复壮周期：30 d ～ 40 d。 种蜂扩繁 以柞蚕卵为中间寄主，将种蜂扩繁 2 代 ～ 3 代： a) b) c) d) e) f) 6.3 接蜂比例：螟黄赤眼蜂为 1：25，松毛虫赤眼蜂为 1：30（种蜂寄生柞蚕卵：新鲜柞蚕卵）； 接蜂时间：1 d； 接蜂条件：全黑暗，（25 ± 1）℃、RH（75 ± 5）%； 发育条件：同 5.5.3 b)； 将末一代种蜂发育至幼虫中后期置于（3 ± 1）℃、RH（75 ± 5）% 条件下冷藏； 冷藏时间螟黄赤眼蜂不超过 10 d，松毛虫赤眼蜂不超过 15 d。 柞蚕卵准备 6.3.1 暖茧发蛾 暖茧室保持 18 ℃ ～ 22 ℃、RH（70 ± 5）%，20 d ～ 25 d 后柞蚕茧羽化出蛾。 6.3.2 收蛾 在柞蚕蛾羽化期内，随时采收杠羽化（展翅前）雄蛾，避免交尾，次日清晨人工收雌蛾，用于 当天繁蜂或储存在（3 ± 1）℃ 的冷库中备用。 6.3.3 剖腹取卵 用人工方法将柞蚕雌蛾腹部与头胸部分离，剖腹取卵。 6.3.4 6.3.4.1 6.3.4.2 6.3.5 4 洗卵及消毒 用搅拌器将卵与蛾腹内杂物搅拌分离，加入清水反复漂洗数次，除去杂物，留下蛾卵。 将清洗干净的新鲜卵用 0.1% 的苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）浸泡 5 min。 脱水晾卵 DB 22/T 3315—2021 消毒后的新鲜卵用纱网袋装好，用脱水机进行初步脱水，然后用烘干机烘干，温度不超过 25 ℃ ～ 28 ℃。 6.3.6 清除绿卵 烘干的新鲜卵用色选机等专用设备清除绿卵后，再用于接蜂，绿卵率 ≤ 4%。 6.4 接蜂 6.4.1 比例 松毛虫赤眼蜂寄生卵、螟黄赤眼蜂寄生卵、新鲜柞蚕卵比例为 3：7：210。 6.4.2 时间 当种蜂羽化率达到 25% ～ 30% 时，将两种赤眼蜂种蜂卵均匀撒在接蜂盘中，铺上 2 mm 孔径 的纱网，再将定量的新鲜柞蚕卵平铺到纱网上，送入（25 ± 1）℃、RH（75 ± 5）% 的暗室内产 卵寄生，接蜂 48 h 后，去除种蜂，标明日期送入发育室。 6.5 培养发育 在（25 ± 1）℃、RH（75 ± 5）% 条件下继续发育 24 h 至幼虫后期。 6.6 寄生卵冷藏 将发育至幼虫后期的螟黄赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂的共寄生卵，平铺到卵盘中置于冷库内货架上 冷藏： a) b) c) 6.7 铺卵厚度 3 mm ～ 4 mm； 冷藏温度 （3 ± 1）℃、RH（75 ± 5）%，全黑暗； 冷藏时间不应超过 24 d。 发育与精选 6.7.1 发育 根据害虫发生时间将冷藏共寄生卵按如下步骤发育： a) b) 6.7.2 在（15 ± 1）℃、RH（75 ± 5）%，全安条件下加温 1 d； 按 5.5.3 b) 变温发育至预蛹期。 精选 用绿卵色选机除去未寄生卵、劣质卵、绿卵及其它杂质。 6.7.3 再发育 将精选后的寄生卵，置于发育室按 5.5.3 b) 变温发育至蛹后期。根据田间放蜂时间，必要时 再按 6.6 的方法冷藏，冷藏时间不应超过 3 d。 7 过程记录 5 DB 22/T 3315—2021 建立共寄生繁育松毛虫赤眼蜂和螟黄赤眼蜂工厂化生产档案，对整个生产过程进行详实记录， 保存 2 年以上，做到可追溯，记录并保持一下内容： a) b) c) d) e) f) 6 执行各个阶段程序的人员姓名； 执行各个阶段程序的时间； 执行各个阶段程序的地点； 执行的具体操作内容； 记录执行的结果或观察到的现象； 其它。 DB 22/T 3315—2021 A A 附 录 A （资料性） 螟黄赤眼蜂及松毛虫赤眼蜂形态学鉴定方法 A.1 制作鉴定拨片及观察测量 将用浓度 75% ~ 95% 酒精浸泡的雄性赤眼蜂标本按下列方法制作为玻片： a) b) c) A.2 在 5% 的 KOH 溶液中浸泡 8 h ~ 15 h，并用水清洗干净，置于载玻片上； 在解剖镜下，用昆