65.020.01 CCS B 60 ICS DB 21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3561—2021 小叶白蜡组织培养技术规程 Technical regulation for tissue culture of Fraxinus bungeana 2021 - 12 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2022 - 01 - 30 实施 发 布 DB21/T 3561—2021 目 次 1 范围................................................................................ 1 2 规范性引用文件 ...................................................................... 1 3 术语和定义 .......................................................................... 1 4 培养基制备 .......................................................................... 1 5 无菌体系建立 ........................................................................ 1 6 培养条件 ............................................................................ 2 7 继代培养 ............................................................................ 2 8 增殖培养 ............................................................................ 2 9 生根培养 ............................................................................ 2 10 炼苗 ............................................................................... 3 11 驯化移栽 ........................................................................... 3 12 苗期管理 ........................................................................... 3 13 定植 ............................................................................... 3 14 技术档案管理 ....................................................................... 3 附录 A（资料性）小叶白蜡生物学特性、生态学特性及用途 .................................. 4 I DB21/T 3561—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规 则编写。 本文件由辽宁省林业和草原局提出并归口管理。 本文件起草单位：辽宁生态工程职业学院。 本文件主要起草人：沙学平、陈清霖、李国侠、张凌梅、沙学仁、岳彦桥、张录华、张可教、穆怡 陶、金星、朱瑞、胡振全、冯颖、吴欣然、孙德新、杨晓铭、杨丹、高明娟、傅海英、刘姗姗、陈丽媛、 宋丹、徐绍海、赵晓敏、荆吉国、汤铭阳、谭洋、杨艳凤、刘长霞、张薇、赵霜、程彦博、李智尧、薛 丹、张姣美、单兴宇、陈青云。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省林业和草原局（沈阳市和平区太原北街 2号），联系电话： 024-23448927。 文件起草单位通讯地址：辽宁生态工程职业学院（沈阳市苏家屯区枫杨路186号），联系电话： 024-89814005。 II DB21/T 3561—2021 小叶白蜡组织培养技术规程 1 范围 本文件规定了小叶白蜡（Fraxinus bungeana DC.）组织培养技术的培养基制备、无菌体系建立、培 养条件、初代培养、继代培养、增殖培养、生根培养、炼苗、驯化移栽、苗期管理、定植、技术档案管 理等技术内容。 本文件适用于辽宁省范围内小叶白蜡的组织培养育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1882 林木组织培养技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 小叶白蜡 fraxinus bungeana DC. 又名小叶花曲柳、小叶梣，属木犀科（Oleaceae）白蜡树属（Fraxinus）落叶小乔木或灌木。其生物 学特性、生态学特性及用途参见附录 A。 4 培养基制备 4.1 培养基配制、灭菌及保存 按照 LY/T 1882 的规定执行。 4.2 培养基选择 诱导培养基：WPM+20 g/L 蔗糖+6 g/L 琼脂；继代增殖培养基：WPM+0.5 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA+20 g/L 蔗糖+6 g/L 琼脂； 生根培养基：WPM+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/LNAA+20 g/L 蔗糖+6 g/L 琼脂。pH5.6~5.8。 5 无菌体系建立 1 DB21/T 3561—2021 将种子灭菌后接种在诱导培养基上启动培养，待种子萌发真叶长出后，再继续进行继代增殖培养。 5.1 种子选取与采集 于秋季种子成熟后，选择连续 3 d 以上的晴天，从生长健康、无病虫害、已结实的小叶白蜡母株上 选取成熟饱满的种子，置于自封袋内带回。 5.2 种子预处理 首先将种子进行 4 ℃冷藏处理 24 h~72 h。取出后置于流水下冲洗 20 min，去除表面脏物。再放 于洗衣粉水中浸泡 30 min，期间不断刷洗种子，进行深层清理，并去掉种翅。然后种子置于流水下冲 洗 1 h~2 h，用干净滤纸吸干水分，移至超净工作台备用。 5.3 种子灭菌处理 将种子倒于无菌烧杯中，用 70％酒精浸泡 30 s，期间不断摇晃烧杯以保证每粒种子都能充分接触 到酒精，之后用无菌水反复冲洗 4 次~5 次，再用 0.1％升汞分别灭菌 8 min~12 min，立即用无菌蒸馏 水反复仔细冲洗 5 次~7 次，每次停留 1 min~2 min，之后取出种子放在盛有无菌滤纸的接种盘上，吸 干水分备用。 5.4 初代培养 将无菌接种盘中已吸干水分的种子用无菌手术刀和镊子去掉外种皮，接种于诱导培养基上， 5 d 后外植体开始萌动，表现为在种子的下胚轴露出白色胚根，叶片颜色健康，大小正常，种子萌发率高达 91%，可以快速获得无菌苗。 6 培养条件 培养室内温度 25±2 ℃，湿度 40%~50%，光照强度 2000 Lx~3000 Lx，光周期 12 h~16 h，培养周 期 6 周~8 周。 7 继代培养 将已萌发的无菌苗培养2周~3周后，转接种到继代培养基上进行继代培养，每个培养瓶内接种2株 ~3株，并分布均匀。 8 增殖培养 当无菌苗长到苗高为3 cm~5 cm时，将无菌苗剪接成2个~3个带芽茎段转接到新鲜的培养基上继续 培养，增殖培养周期为20 d~30 d。 9 生根培养 2 DB21/T 3561—2021 当增殖培养获得一定数量无菌苗后，选取生长健壮的无菌苗转接入生根培养基上进行生根培养， 培养2周后可见有根长出，4周后平均生根条数＞5条。 10 炼苗 生根后2周~3周，选取根长1.5 cm~2.5 cm、须根不少于3条的试管苗，将其放置温室自然散射光下， 打开培养瓶盖炼苗2 d~3 d，控制温度在18 ℃~28 ℃。 11 驯化移栽 炼苗后，从培养瓶中取出试管苗，用流水冲洗掉粘附于根部的培养基，放入准备好的托盘中，用 纱布盖好，待用。以草炭土、蛭石配比为1：1混合作为移栽基质，并加入0.5 g/L的多菌灵搅拌均匀， 然后装入穴盘中，移入试管苗，扶正，使根系尽量舒展，用基质将根埋好并压紧。每天用细雾喷壶喷水， 使环境湿度保持在90%左右，安装遮阴网进行遮阴处理。经过30多天的驯化，当苗木表现为叶色深绿， 叶片增大，有新叶长出，根毛增多，可移栽至营养钵。 12 苗期管理 12.1 水肥管理 移栽后，在遮荫且通风条件下培养 4 d~5 d，每天向叶面喷水 1 次，1 周后，撤掉遮荫，并注意通 风。夏季施氮肥 2-3 次。 12.2 病虫害防治 移栽后经常检查新叶生长情况。若发生叶部病害，可用 80%代森锰锌可湿性粉剂 500 倍~800 倍液 喷施苗木 1 次~2 次。 13 定植 当年秋季或翌年春季移栽至圃地。 14 技术档案管理 每批驯化移栽的苗木都要配有标签，建立相应育苗技术管理档案，具体按照GB/T 6001执行。 3 DB21/T 3561—2021 附 录 A （资料性） 小叶白蜡生物学特性、生态学特性及用途 A.1 生物学特性 树高 5m。树皮暗灰色，浅裂。冬芽卵圆形，近黑色，密被褐色短绒毛。奇数羽状复叶对生，小叶 5 片（3 片~7 片），菱状卵形或卵圆形，边缘具钝锯齿，近基部全缘，两面无毛。花杂性，圆锥花序生于 当年生小枝顶端及叶腋，与叶同时开放或后于叶开放；花瓣 4 片，白色带黄绿色。翅果倒卵状长圆形或 倒披针形，顶端钝或微凹。 A.2 生态学特性及用途 主要在温带地区分布，辽宁省产于凌源、喀左、绥中、建平、北票、葫芦岛和朝阳等地区。其树干 笔直枝叶茂盛，树形优美，为速生树种，花朵在 5 月盛开，盛开时为白色，花朵虽然不大但是较为密集 紧凑，组合而成的圆锥形花序极具观赏价值，是园林绿化的优良树种，常被用于庭院绿化、公园、行道 树、道路绿化、小区主干道、农田防护林等。耐寒耐旱耐盐碱，喜光，不耐荫，耐干燥瘠薄土壤，不耐 湿涝，抗逆性较