ICS 65.020.20 CCS B 05 黑 DB23 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 3 0 3 3—2021 东北百里香组培繁殖技术规程 2021 - 12 - 24 发布 黑龙江省市场监督管理局 2022 - 01 - 23 实施 发 布 DB23/T 3 0 3 3—2021 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省林业和草原局提出。 本文件起草单位：东北林业大学、黑龙江省电力科学研究院、绥棱县应急管理局、绥棱县国有林场 发展服务中心、海伦市森林资源保护中心、海伦市陈家店林场。 本文件主要起草人：范丽娟、王玉喜、赵玉彬、苗雨蕾、钱大勇、史恭发、闫蕾、吕汝彤、叶王斌、 赵蕊阳、刘桂伶、杨娟、付海静、王玲、王金红。 Ⅰ DB23/T 3033—2021 东北百里香组培繁殖技术规程 1 范围 本文件规定了东北百里香（Thymus mandschuricus Ronn.）组培繁殖的环境与设备消毒、培养基配 制、外植体的制备、培养条件、不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养、炼苗、温室移栽及管理和生产档 案。 本文件适用于东北百里香组培繁殖。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用性文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 LY/T 1882—2010 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 2306—2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 环境与设备消毒 4.1 接种室消毒 接种室消毒按 NY/T 2306—2013 中 8.6 的规定执行。 4.2 培养室消毒 培养室消毒按 NY/T 2306—2013 中 8.7 的规定执行。 4.3 超净工作台消毒 超净工作台消毒按 NY/T 2306—2013 中 8.5 和 8.6 的规定执行。 4.4 接种器具消毒 接种器具按 NY/T 2306—2013 中 8.4 的规定执行。 5 培养基配制 5.1 母液配制 培养基母液配制按 NY/T 2306—2013 中 7.3 的规定执行。 1 DB23/T 3033—2021 5.2 培养基配制 5.2.1 培养基配方 培养基配制成分如下： a) 初代培养基：MS＋0.5 mg/ L 6-BA＋30 g/L 蔗糖＋固化剂，灭菌前培养基 pH 值调制为 5.8～6.0； b) 不定芽增殖培养基：MS＋0.5 mg/L 6-BA＋0.1 mg/L NAA＋30 g/L 蔗糖＋固化剂，灭菌前培养基 pH 值调制为 5.8～6.0； c) 生根培养基：1/2MS＋0.5 mg/L IBA＋30 g/L 蔗糖＋固化剂，灭菌前培养基 pH 值调制为 5.8～6.0。 5.2.2 培养基配制方法 培养基配制方法按 NY/T 2306—2013 中 7.4 执行。 5.3 培养基灭菌及保存 培养基灭菌及保存方法按 LY/T 1882—2010 中 4.2 进行。 6 外植体的制备 6.1 外植体的选择 宜 6 月~ 8 月，从健康植株上选取中上部半木质化的枝条，剪成 5 cm 长的茎段。 6.2 消毒 将外植体在洗衣粉水中浸泡 15 min，自来水冲洗 1 h ~2 h 后，置于超净工作台上，用 75 %的酒精 浸泡 10 s～30 s，无菌水冲洗 4 遍~6 遍，加入 2 %的次氯酸钠溶液搅拌杀菌 15 min 或 0.1%的升汞杀菌 8 min~10 min，无菌水冲洗 4 遍~6 遍，用无菌滤纸吸干材料表面水分，切割成 1 cm~1.5 cm 长的带腋芽 的茎段。 7 培养条件 培养条件为 24℃～28℃，光周期为 14 h/d，光照强度 3000 Lux，空气相对湿度 60%～80%。 8 不定芽诱导 将带有腋芽的茎段接种到诱导不定芽的初代培养基上，培养 15 d～20 d，获取不定芽备用。 9 不定芽增殖 切下不定芽，垂直插入不定芽增殖培养基中，插入深度 0.5 cm 左右，培养 30 d。待分化的不定芽 形成芽丛后，分割新长出的不定芽。可按需求重复继代。 10 生根培养 选取培养瓶中长度 2 cm ～3 cm 生长健壮的不定芽转接至生根培养基中，插入深度为 0.5 cm，培养 ≥20 d。 2 DB23/T 3033—2021 11 炼苗、温室移栽及管理 11.1 炼苗 在组培苗根长至 2 cm～3 cm 时，在培养室中半开封口膜放置 1 d，再去掉封口膜放置 1 d，用镊子 取出组培苗，用自来水冲洗附着在根上的培养基，放入底部装有自来水的三角瓶中水培，水的深度以没 到组培苗根颈部为宜，2 d 后移栽。 11.2 温室移栽及管理 11.2.1 移栽准备 将蛭石在 121℃高压灭菌锅中灭菌 20 min，放凉后装入规格为 10 cm×11 cm×8.5 cm 的花盆中， 装至花盆高度的 2/3，压实。 11.2.2 移栽 取出组培苗，在散射光下移栽至花盆的蛭石中，使根尽量伸展开，压实，浸透水，放入人工气候箱 内缓苗，培养条件为 24℃～28℃，光周期为 14 h/d，光照强度 3000 Lux，空气相对湿度 60%～80%。15 d 后移至温室。 11.2.3 移栽后管理 移栽初期，保持空气湿度≥60%，适时浇水，保持基质湿润，温度控制在 18℃～25℃。生长期见干 见湿。定期除草。 12 生产档案 应建立生产档案，内容包括：环境与设备消毒、培养基配制、外植体的制备、培养条件、不定芽诱 导、不定芽增殖、生根培养、炼苗、温室移栽及管理等。 _______________________ 3